手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
材料與儀器
DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式為C16 H15 N5 ·2C3 H6 O3 ，分子量457.48。
DAPI 是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料。它結(jié)合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對(duì)處，一個(gè)DAPI分子可以占據(jù)三個(gè)堿基對(duì)的位置。結(jié)合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強(qiáng)度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測(cè)，根據(jù)熒光的強(qiáng)度可以確定DNA的量。另外，因?yàn)镈API可以透過(guò)完整的細(xì)胞膜，它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。
在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長(zhǎng)的光線激發(fā)。單獨(dú)DAPI的最大吸收波長(zhǎng)為340nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm；當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)為364nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI也可以和RNA結(jié)合，但產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度只有與DNA結(jié)合的熒光強(qiáng)度的1/5，其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍約在500nm左右。
步驟
DAPI的配制及貯存
固體粉末 ：避光，2-8 ℃保存，3年沒(méi)有問(wèn)題。
貯存液 ：用無(wú)菌水配制成濃度1 mg/ml 的貯存液，配好后用錫紙包起來(lái)，避光，可在-20 ℃下長(zhǎng)期保存。（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）
使用濃度 ：貯存液用1xPBS稀釋到終濃度100 ng/ml。
熒光封片液 ：0.5 mol/L碳酸鹽緩沖液與甘油等體積混合，pH9.5
染色與觀察 ：制好的玻片上滴加幾滴DAPI染液，染色10分鐘，流水沖去染液，濾紙吸除多余水分，加一滴熒光封片液，置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng)360-400nm。
注意事項(xiàng) ：DAPI可能具有致癌性，全部操作過(guò)程中必須帶塑料或乳膠手套。
推薦廠商 ：Invitrogen，Sigma
結(jié)構(gòu)式 ：
以下英文介紹摘自Wikipedia 。
DAPI or 4',6-diamidino-2-phenylindole is a fluorescent stain that binds strongly to DNA. It is used extensively in fluorescence microscopy. Since DAPI will pass through an intact cell membrane, it may be used to stain both live and fixed cells.
For fluorescence microscopy, DAPI is excited with ultraviolet light. When bound to double-stranded DNA its absorption maximum is at 358 nm and its emission maximum is at 461 nm. (This emission is fairly broad, and appears blue/cyan.) DAPI will also bind to RNA, though it is not as strongly fluorescent. Its emission shifts to around 500 nm when bound to RNA.
DAPI's blue emission is convenient for microscopists who wish to use multiple fluorescent stains in a single sample. There is fluorescence overlap between DAPI and green-fluorescent molecules like fluorescein and green fluorescent protein (GFP), or red-fluorescent stains like Texas Red, but using spectral unmixing or taking images sequentially can get around this.
Apart from labelling cell nuclei, the most popular application of DAPI is in detection of mycoplasma or virus DNA in cell cultures.
Because DAPI easily enters live cells and binds tightly to DNA, it is toxic and mutagenic. Care should be taken in its handling and disposal.
The Hoechst stains are similar to DAPI in that they are also blue-fluorescent DNA stains which are compatible with both live- and fixed-cell applications
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心