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細(xì)胞在適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的時(shí)候要注意哪些事項(xiàng)
細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。無血清培養(yǎng)基不加動(dòng)物血清，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長有效因子，激素等。
有許多細(xì)胞系是相對(duì)容易適應(yīng)無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基的，而對(duì)環(huán)境變化相對(duì)敏感的其它細(xì)胞則難以適應(yīng)變化，這就需要更為專業(yè)的方法來讓細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境變化。
而根據(jù)細(xì)胞系的特性，有兩種方法可使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。第一種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法；另一種方法是直接適應(yīng)。
在適應(yīng)過程中，細(xì)胞通常對(duì)PH和溫度變化較為敏感。讓細(xì)胞在每個(gè)階段都至少有一個(gè)適應(yīng)過渡期。
細(xì)胞存活率和細(xì)胞密度
細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長期中期快速分裂，且在適應(yīng)過程開始時(shí)，存活率大于90%。這一點(diǎn)至關(guān)重要。當(dāng)細(xì)胞需傳代時(shí)，建議采用1:2或1:3的小傳代比例，以維持更高的細(xì)胞密度，同時(shí)提供隔絕期間可能有助于細(xì)胞的細(xì)胞生長因子。
當(dāng)細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時(shí)，在增大細(xì)胞傳代密度。
細(xì)胞生長
如果在適應(yīng)過程中，細(xì)胞停止了生長，則需讓細(xì)胞有更多的時(shí)間來適應(yīng)培養(yǎng)基組合。例如，在方法1的階段4，向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細(xì)胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基。
然后，在幾個(gè)過渡期內(nèi)，緩慢地減少血清量，直至學(xué)清量為0。
懸浮培養(yǎng)物
一些公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞貼壁因子。在一段過渡期內(nèi)，貼壁細(xì)胞將開始離開表面，并成為懸浮細(xì)胞系開始生長。細(xì)胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化。監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長速度，只要細(xì)胞能夠與新系統(tǒng)相融合，任何形態(tài)變化都不重要。
細(xì)胞叢
在適應(yīng)于無血清培養(yǎng)期間，細(xì)胞容易形成叢。傳代培養(yǎng)時(shí)，將叢輕輕折斷，使其分散開。將培養(yǎng)物從靜止細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶?jī)?nèi)，這樣可能會(huì)有助于防止細(xì)胞叢的形成。
抗生素
由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此，不建議在無血清適應(yīng)過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白，則抗生素水平可能會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。
預(yù)防措施
確保在開始適應(yīng)過程前，儲(chǔ)存有大量原培養(yǎng)基的細(xì)胞。如果細(xì)胞沒有存活到下一階段，則在整個(gè)過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶。
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