三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）的檢驗(yàn)原理與應(yīng)用！

一、背景

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）用于鑒別腸道菌發(fā)酵蔗糖、乳糖、葡萄糖及產(chǎn)生硫化氫的生化反應(yīng)。胨和牛肉浸出粉提供氮源、碳源和維生素;乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時(shí)通過(guò)酚磺肽指示劑測(cè)出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

二、檢驗(yàn)原理

蛋白胨、牛肉浸粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì)；乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時(shí)通過(guò)酚紅指示劑測(cè)出，酸性呈黃色，堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：

稱取本品64.5g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,加熱煮沸1分鐘,分裝于16mm×150mm試管,121℃高壓滅菌15分鐘制成高層斜面。

三、應(yīng)用

用于雞白痢沙門氏桿菌的分離鑒定及滅活菌苗的研制：

在把從疫源地分離鑒定的雞白痢沙門氏桿菌強(qiáng)毒株研制成油乳劑滅活菌苗和蜂膠滅活菌苗以預(yù)防雞白痢沙門氏桿菌病。

從白痢的發(fā)病雞只及雞白痢全血平板凝集呈陽(yáng)性的淘汰蛋雞共191只雞中,檢測(cè)到80只雞罹患雞白痢,在其體內(nèi)分離到雞白痢沙門氏桿菌21株,分離株在S·S瓊脂平板上呈園形、邊緣整齊、稍隆起、表面濕潤(rùn)、光滑、透明的露珠狀細(xì)小菌落,鏡檢為革蘭氏陰性（G-）、兩端鈍園、中等大小、散在排列的桿菌,三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)上層呈黃色,不利用乳糖、蔗糖,能產(chǎn)生硫化氫,具有賴氨酸脫羧酶和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶,發(fā)酵糖類時(shí)均產(chǎn)生氣體,與沙門氏桿菌屬0多價(jià)（A-F）診斷血清反應(yīng)發(fā)生凝集,與單因子血清01、09、012均呈現(xiàn)凝集,與單因子血清Ha、Hb、Hc、Hd和He均無(wú)凝集現(xiàn)象。

證明這21株是雞白痢沙門氏桿菌,從中篩選出SR96-1、SC14-H、SC18-L3株強(qiáng)毒株,三強(qiáng)毒株攻毒雛雞,12h后有95%的雞發(fā)病,表現(xiàn)精神萎糜,畏寒,拉稀,糞便呈白色石膏樣粘附于周圍,32-48h可見(jiàn)死亡,剖解,肝臟嚴(yán)重壞死,肺臟嚴(yán)重出血,盲腸水腫,同時(shí)回收到分離株,攻毒二月齡育成雞和成年雞6天后剖殺,可見(jiàn)肝表面有針尖大小、數(shù)量不一的壞死灶,膽囊腫大,脾腫大,心包膜增厚,心包液增多,心外膜發(fā)炎或心肌壞死灶等變化,尤以肝病變?yōu)樽睢?/p>

三強(qiáng)毒株和標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)雛雞的半數(shù)致死量LD50分別是SR96-1LD50=2.04×104個(gè)/只;SC14-HLD50=4.43×104個(gè)/只;SC18-LLD50=1.38×104個(gè)/只;標(biāo)準(zhǔn)株C79-13-4LD50=1.39×104個(gè)/只,對(duì)2月齡育成雞、成年雞的半數(shù)感染量ID50分別是1.197×108、1.897×108;雞白痢沙門氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株每ml含菌量是6.145×109個(gè)菌/ml。表明分離菌株的毒力強(qiáng)于或相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)株,具有地方代表性,可做菌苗候選株。

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