摘要：本研究考察了何時(shí)使用親水相互作用液相色譜 (HILIC) 以及何時(shí)使用反相液相色譜(RPLC) 柱分析難以保留的極性小分子和離子化分子。所示數(shù)據(jù)表明了分析物/樣品、流動(dòng)相、檢測(cè)模式和其他方法適用性要求（保留性、分離度、靈敏度和峰形）的影響。

前言： 使用反相液相色譜法充分保留和分離極性  小分子是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。烷基固  定相液相色譜柱（例如 C18）通常是液相  色譜方法開(kāi)發(fā)。然而，高極性分析  物對(duì)非極性 C18 固定相的親和力較低，  保留性較差。我們可以探索幾種能夠在反  相模式下保留這些化合物的技術(shù)，例如，  向流動(dòng)相添加離子對(duì)試劑或?qū)Ψ治鑫镞M(jìn)行  衍生化。離子對(duì)試劑會(huì)污染液相色譜柱和  系統(tǒng)，一般不適用于 LC/MS。通常也不  建議采取衍生化操作，因?yàn)檫@是一個(gè)繁瑣  的額外步驟，會(huì)增加樣品的前處理時(shí)間，  并可能導(dǎo)致錯(cuò)誤和重現(xiàn)性問(wèn)題。

要想成功地保留和分離極性分析物，一個(gè)更好的做法是探索各種固定鍵合相。部分鍵合相非常適合棘手的極性分析物。在反相模式下，存在極性更高的鍵合相，它們使極性分析物與固定相之間的相互作用變得更強(qiáng)。其中許多固定相也可用于非常弱的流動(dòng)相，如 100% 水相，從而更好地保留極性化合物。除了反相鍵合相，市面上還有幾種親水相互作用液相色譜 (HILIC) 柱固定相。HILIC 模式使用極性固定相保留極性化合物。在給定的分析中，哪一種色譜柱和哪一種液相色譜模式是選擇，可由其他方法因素決定，包括分析物溶解度、流動(dòng)相和檢測(cè)模式。

現(xiàn)代液相色譜柱通常填充表面多孔顆粒填  料，這種填料以其在低反壓下的高柱效而  聞名。高柱效有助于分離相鄰洗脫峰，而  低反壓使液相色譜儀更具靈活性。  本研究展示了一種合乎邏輯的逐步式方  法，使化學(xué)家能夠利用表面多孔顆粒填料  液相色譜柱實(shí)現(xiàn)對(duì)極性分析物的保留、分離和檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)部分：本實(shí)驗(yàn)采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)與 Agilent Ultivo LC/TQ。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)配置的系統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，以減小系統(tǒng)體積和擴(kuò)散。表 1 示出了配置詳情。

結(jié)論：找到能保留和分離所有分析物的色譜柱。 • RPLC 不能保留所有極性/離子化分析物；HILIC 可能適用于這些分析物 • 某些分析物在這兩種液相色譜模式下均可實(shí)現(xiàn)同樣出色的保留和分離考慮樣品：分析物溶解度和樣品溶劑。 • 在 RPLC 和 HILIC 中進(jìn)樣強(qiáng)溶劑，均會(huì)對(duì)色譜分析質(zhì)量產(chǎn)生不利影響 • 隨著進(jìn)樣量的增加，強(qiáng)溶劑影響更嚴(yán)重 • 相比乙腈，極性化合物通常更易溶于水，這對(duì) RPLC 是有利的

可使用哪種檢測(cè)器？ • 確保分析物與所選檢測(cè)器兼容，并且滿足靈敏度要求 • HILIC 可以改善 LC/MS 分析，因?yàn)榱鲃?dòng)相更易揮發(fā) • UV 和 RPLC 與多種流動(dòng)相兼容，這可以改善分析物的保留和分離特性選擇 HILIC 還是 RPLC 是一種平衡考量，需要仔細(xì)考慮色譜分離要求、分析物極性和溶解度、樣品溶劑的性質(zhì)以及可用的檢測(cè)方式。