23966-2g的廠家2016年底已經(jīng)停產(chǎn)，現(xiàn)在的規(guī)格是23966-1g

Polyscience，Inc，成立于1961年，起家于化學(xué)但超越化學(xué)領(lǐng)域的美國制造商，總部位于賓夕法尼亞州沃靈頓，公司業(yè)務(wù)主要涵蓋三大塊：1.實驗用產(chǎn)品：a）成千上萬種具品牌特色的化合物和試劑，應(yīng)用于實驗室研究，組織學(xué)，電鏡和解剖病理學(xué)以及其他診斷和生命科學(xué)研究；b）種類極其寬廣的單體和聚合體，滿足各方研究領(lǐng)域；c）有機/無機化合物，生物可降解材料，磁珠，熒光素，染料和特定抗體，以及常規(guī)蛋白包被顆粒（直徑范圍40nm~10mm）的首要制造工廠；d）頂端多聚化合物的供貨中心，滿足各種高性能工業(yè)領(lǐng)域需求，包括替代能源，汽車電子，國防&航空電子，便攜式通信和計算機，醫(yī)療器械組裝。2. 定制合成；3.cGMP生產(chǎn)服務(wù)。

PEI轉(zhuǎn)染手冊

轉(zhuǎn)染操作流程：
 
  1、細(xì)胞傳代：

轉(zhuǎn)染前24h內(nèi)分離293T細(xì)胞至含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中進行傳代培養(yǎng)，接種密度如下：
         6孔板：0.5x106細(xì)胞
         10cm培養(yǎng)皿：4.0x106細(xì)胞
         15cm培養(yǎng)皿：9.0x106細(xì)胞

2、轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫。

2.1質(zhì)粒DNA的稀釋

在無菌試管中，用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yǎng)基（濃度為10％）稀釋質(zhì)粒DNA（ug）。病毒包裝體（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重組質(zhì)粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
       

6孔板：200ul+3ug的DNA
        10cm培養(yǎng)皿：1ml+7-8ug的DNA
        15cm培養(yǎng)皿：2ml+11-12ug的DNA

   2.2 轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成

將PEI（1ug/uL）加入已稀釋的總DNA中，PEI與DNA（ug）的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
      

 6孔板：9ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=9ug
        10cm培養(yǎng)皿：21ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=21ug
        15cm培養(yǎng)皿：33ul PEI復(fù)合體（1ug/ul）=33ug
將添加到細(xì)胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。


4、收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞

轉(zhuǎn)染后48小時內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞/或病毒上清。
 
試劑的配制：
PEI（1ug/ul） Polysciences（CAT＃23966-2配制成儲液：)
1、將無內(nèi)毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI，冷卻到室溫。
2、調(diào)整pH值至7.0，用0.22um的濾器過濾消毒，分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃
 

Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 23966-2為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品，每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測,保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質(zhì),但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實驗室因素(PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dna純度…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度，分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴