以下是ELISA檢測試劑盒常見問題問答整理分析出來以方便各位了解：

（1）問：小鼠乙酰膽堿Elisa檢測試劑盒后期數(shù)據(jù)處理中空白的OD值有什么作用？

答：可以將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值同時(shí)減去空白的值進(jìn)行計(jì)算，或者都不減，保持同一水平就行

。

（2）問：那我們算出來的ACH含量為什么出現(xiàn)負(fù)值？

答：說明個(gè)別樣本的濃度很低,當(dāng)濃度接近第6個(gè)點(diǎn)的時(shí)候,直線方程就有可能計(jì)算出負(fù)值。

（3）問：我兩個(gè)空白孔一個(gè)啥都不加，一個(gè)加了后面的A液，B液還有終止液, 請問用哪一個(gè)

？

答:用加了A液，B液還有終止液的那個(gè)更加準(zhǔn)確,因?yàn)闃颖径技舆^這些，可以排除相應(yīng)的干擾。

（4）問：我想問一下，標(biāo)準(zhǔn)品濃度與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值之間是不是線性回歸？檢測出來的吸光度

值很低一般都存在哪些原因？大部分在0.08左右 ？（大鼠5羥色胺（5-HT）Elisa檢測試劑盒

）

答：是線性回歸。檢測出來的值比較低 ，樣本、稀釋、操作等，原因很多，但只要在可操作范

圍就行 。

（5）問：做出來的結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度呈線性回歸，但是樣品的吸光度都和本體吸光度值接

近，正常未予干預(yù)的大鼠血漿都基本沒有5-HT 表達(dá)，這是什么原因？（大鼠5羥色胺（5-HT）

Elisa檢測試劑盒）

答：樣本、稀釋、室控和機(jī)器操作等，原因都可能造成吸光度都和本體吸光度值接近，好像熒

光法里面有種試劑盒可以檢測滴度。

（6）問：Elisa檢測試劑盒的使用的方法是什么啊？

答：采用雙抗夾心法 （目前暫行）

（7）問：一個(gè)孔需要多少量的血清？

答：一個(gè)孔上樣量10-50微升。

（8）問:未處理的樣本我需要郵寄多少的量？

答：每個(gè)孔需要100ul

（9）問：樣本怎么保存？

答：當(dāng)天要用的樣本保存4℃，隔天樣本-20℃（近期一個(gè)月左右要用的樣本），長期保存樣本

-70℃（一年或者更長時(shí)間多久都可以用），避免反復(fù)凍融。

（10）問：EP管是什么管？

答：離心管。

（11）問：收集血清的時(shí)候用什么管？

答：普通離心管即可。

（12）問：96t可以檢測多少個(gè)樣本？48t可以檢測多少個(gè)樣本？

答：96t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測85個(gè)樣本，其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照。96t單孔可以檢測90

個(gè)樣，7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品控 1個(gè)空白對(duì)照。48t標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測37個(gè)樣本，其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)

空白對(duì)照。48t單孔可以檢測40個(gè)樣本，其他有7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，1個(gè)空白對(duì)照。

（13）問：標(biāo)準(zhǔn)的檢測85個(gè)樣本的和單孔相比， 有什么好的地方嗎？

答：標(biāo)準(zhǔn)的檢測又叫復(fù)孔檢測，標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)重復(fù)性測的結(jié)果好，所以大家都叫復(fù)孔是標(biāo)準(zhǔn)的檢

測。

（14）問： 酶標(biāo)板分次使用 剩下的建議怎么保持 ？

答：要是真的用不完或標(biāo)本不多的情況下。做點(diǎn)處理后：板條和板架都是可拆卸的，可以再用

之，前拆下4條放置錫箔袋或其他無污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（15）問：酶標(biāo)包被版是酶標(biāo)板嗎？

答：是的。

（16）問：請問植物茉莉酸和水楊酸檢測的試劑盒，我們提取擬南芥的，一般取樣量是多少？

答：1-3g。

（17）問：大鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B）ELISA，大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b

（TRACP-5B），我發(fā)現(xiàn)試劑盒里缺少標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，沒有它我的實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行，盒子里面有特

殊稀釋液是用來稀釋樣品的，但都沒有標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，我的樣品已超出zui低檢測限，所以需要

稀釋標(biāo)準(zhǔn)品才行嗎？

答：特殊稀釋液是用來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的，特殊稀釋液一般情況不用當(dāng)樣本濃度特別高是先用特殊

稀釋液稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品需要再稀釋就也要用特殊稀釋液。

（18）問：測出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線值前面幾盒都是0.98 才正常，后面怎么變成0.93了？

答：某個(gè)點(diǎn)偏離大可以去掉，保留5個(gè)點(diǎn)

（19）問：是不是空白對(duì)照就是什么都不加？

答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標(biāo)試劑 其他都可以加。

（20）問：樣本稀釋液是配好的嗎？

答：樣本稀釋液是配好的

（21）問：樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎？

答：可以，直接加40ul就可以。

（22）問：檢測的時(shí)候需要在操凈臺(tái)中操作嗎，還是在外面操作就可以了？

答：要求不是很嚴(yán)格，根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備而定，都可以。

（23）問：人和肽素（copeptin）Elisa，洗滌液是濃縮的，是一次配好，還是現(xiàn)配現(xiàn)用？

答：濃縮的，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（24）問：Elisa方法的不測人血小板第四因子里IgG抗體的滴度嗎？

答：Elisa不測滴度的，熒光法可以測。

（25）問：酶標(biāo)板不平，影響結(jié)果嗎？

答：不影響結(jié)果的。

（26）問：小鼠TNF-α ELISA 我的標(biāo)本是細(xì)胞，我想要測的結(jié)果：抑制TNF的產(chǎn)生 空白組、

模型組、藥物組，藥物組要成梯度抑制TNF的產(chǎn)生、請問Elisa方法的可以測嗎？

答：細(xì)胞可以測 但要分組，得到相應(yīng)的梯度值，計(jì)算結(jié)果。自己需要多查閱文獻(xiàn) 。

（27）問：人睪酮（T）Elisa,人雌三醇（E3）Elisa，是用什么酶標(biāo)記的？

答：辣根酶標(biāo)記的 標(biāo)本里不能加*

（28）問：我測植物水楊酸，標(biāo)本是煙草葉片怎么處理的？那上清液檢測SA時(shí)，還需要用甲醇

抽提嗎？

答：稱取煙葉500mg，研磨成粉末狀，加入5ml濃度為0.01mol，PH值為7.4的PBS溶液，充分勻

漿，離心取上清液（3000-4000轉(zhuǎn)，15分鐘左右），分裝保存，一般需要長期保存需放在-80度

，或者液氮中，備用，不用加甲醇。

（29）問：沒有做出標(biāo)準(zhǔn)曲線來，你知道什么原因嗎？

答：操作肯定有問題，做之前把標(biāo)準(zhǔn)品搖勻下。

（30）問：買同一個(gè)指標(biāo)的幾個(gè)盒子，用不用都做標(biāo)準(zhǔn)曲線？

答：如果同一個(gè)指標(biāo)買了3盒，建議每盒都做個(gè)標(biāo)曲。同一個(gè)盒子 ，即使分幾次用，做一個(gè)標(biāo)

曲也行了，因?yàn)閿?shù)值不會(huì)偏差太大，差不多。