| 供貨周期 |
一個(gè)月 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
人克拉拉細(xì)胞蛋白試劑盒，適用多樣標(biāo)本，采用雙抗夾心 ELISA 法。操作分多步，有諸多注意事項(xiàng)，助力精準(zhǔn)檢測(cè)人樣本中該蛋白含量。
人克拉拉細(xì)胞蛋白試劑盒介紹
人克拉拉細(xì)胞蛋白試劑盒，常以 ELISA 試劑盒形式呈現(xiàn)，在科研領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用，用于精準(zhǔn)定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中克拉拉細(xì)胞蛋白（CC16）的含量 。其檢測(cè)適用范圍廣泛，血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種標(biāo)本類(lèi)型均可作為檢測(cè)對(duì)象 ，同時(shí)可檢測(cè)的動(dòng)物類(lèi)型涵蓋人、猴、大鼠、小鼠等多個(gè)物種。
一、檢測(cè)原理
該試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 。首先，將人克拉拉細(xì)胞蛋白（CC16）單克隆抗體預(yù)先包被在透明酶標(biāo)包被板上。實(shí)驗(yàn)時(shí)，把標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入酶標(biāo)包被板中，經(jīng)過(guò)足夠時(shí)間的溫育，樣本中的 CC16 會(huì)與包被抗體特異性結(jié)合，隨后通過(guò)洗滌操作除去未結(jié)合的成分。接著加入酶標(biāo)工作液，再次溫育，讓酶標(biāo)工作液與已結(jié)合的 CC16 充分反應(yīng)，之后又一次洗滌去除未結(jié)合的酶標(biāo)工作液。此時(shí)，依次加入底物 A 和 B，在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的催化下，底物（TMB）轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，加入酸后，產(chǎn)物顏色變成黃色。顏色的深淺程度與樣品中人克拉拉細(xì)胞蛋白（CC16）的濃度呈正相關(guān)關(guān)系。通過(guò)在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的 OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的 OD 值，即可計(jì)算出樣本中人克拉拉細(xì)胞蛋白（CC16）的含量 。
二、操作步驟
準(zhǔn)備工作：從冰箱取出試劑盒后，需在室溫下復(fù)溫平衡 30 分鐘 ，同時(shí)用蒸餾水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
加樣：取適量酶標(biāo)包被板固定在框架上，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔并做好記錄。標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品；待測(cè)樣本孔先加 10μL 待測(cè)樣本，再加 40μL 樣本xi釋液（樣本稀釋 5 倍）；空白對(duì)照孔則不加樣 。
溫育與洗板：37℃溫育 30 分鐘后進(jìn)行洗板，棄去孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1 分鐘后甩去洗滌液，重復(fù)洗板 4 次 。
后續(xù)操作：每孔加入 50μL 酶標(biāo)工作液（空白對(duì)照孔不加），37℃溫育 30 分鐘后再次洗板。接著每孔先加 50μL 顯色劑 A 液，再加 50μL 顯色劑 B 液，混勻后 37℃避光顯色 15 分鐘 ，之后每孔加 50μL 終止液終止反應(yīng)，顏色會(huì)由藍(lán)色立即轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。
測(cè)定與計(jì)算：以空白孔調(diào)零，在終止反應(yīng)后 15 分鐘內(nèi)，使用 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD 值） ，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng) OD 值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再依據(jù)樣品 OD 值在方程上算出對(duì)應(yīng)濃度，實(shí)際濃度為測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù) 。
三、注意事項(xiàng)
試劑盒從冷藏環(huán)境取出后，必須進(jìn)行室溫平衡，以確保實(shí)驗(yàn)條件的一致性。
標(biāo)本采集后應(yīng)盡早提取并盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，防止樣本變質(zhì)影響檢測(cè)結(jié)果。
酶標(biāo)包被板開(kāi)封后若未用完，需立即裝入密封袋并加干燥劑保存，以免受到環(huán)境因素干擾。
操作過(guò)程中要牢記樣本已稀釋 5 倍，計(jì)算結(jié)果時(shí)需乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度 。
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