關(guān)鍵詞:MiRNA定量PCR|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌MiRNA定量PCR|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
MiRNA定量PCR|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌： http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR
從1996年美國(guó)AppliedBiosystems公司推出實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)以來(lái)，該技術(shù)已經(jīng)越來(lái)越廣泛的應(yīng)用到各類RNA的研究中，成為研究RNA*的實(shí)驗(yàn)手段之一。目前比較常用的方法有兩種：
（1）TaqMan熒光探針?lè)ǎ涸摲椒ㄔ谔禺愋蕴结樀膬啥朔謩e標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)探針完整時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)光被淬滅基團(tuán)吸收；在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，探針被降解，熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，發(fā)出可被檢測(cè)到的熒光，以此來(lái)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR過(guò)程。
（2）SYBR熒光染料法：該方法利用了SYBRGreen熒光染料非特異性與雙鏈DNA結(jié)合并發(fā)光的特性，檢測(cè)PCR的全部進(jìn)程，從而判定初始RNA的量。
常用的miRNA*鏈合成方法
成熟的miRNA大小只有22 nt左右，在用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miRNA時(shí)，難點(diǎn)在于如何識(shí)別如此小的miRNA并合成*鏈。目前常用的用于識(shí)別并合成miRNA*鏈的方法主要有頸環(huán)法和加尾法兩種。
由于成熟miRNA較小，無(wú)法用常規(guī)的方法直接進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄、PCR。所以上述兩種方法分別加PolyA尾及頸環(huán)結(jié)構(gòu)的方法，將miRNA配對(duì)的序列延長(zhǎng)，然后進(jìn)行正常的反轉(zhuǎn)錄及后續(xù)的PCR檢測(cè)。頸環(huán)法只針對(duì)成熟miRNA，特異性相對(duì)較高，但操作繁瑣，成本較高；加尾法可以檢測(cè)到成熟miRNA及pre-miRNA，特異性稍低，但操作及引物設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單。
近年來(lái)，研究人員發(fā)現(xiàn)了越來(lái)越多的miRNA，其中有很多miRNA序列相近，有的僅僅只有一個(gè)堿基差異。這些不同的miRNA雖然序列相近，但是也有著不同的來(lái)源及功能。上述兩種方法雖然解決了miRNA的識(shí)別及后續(xù)PCR問(wèn)題，但是無(wú)法分辨這些只有一個(gè)或者兩個(gè)堿基差異的miRNA。美國(guó)Signosis推出了一種新的miRNA識(shí)別方法，可以分辨僅有單個(gè)堿基差異的miRNA。
美國(guó)Signosis推出的新方法，使用多對(duì)寡核苷酸對(duì)目的miRNA進(jìn)行識(shí)別，單個(gè)堿基差異就可以破壞寡核苷酸與靶標(biāo)序列的結(jié)合，從而分辨單個(gè)堿基差異的miRNA；同時(shí)該方法不用進(jìn)行方轉(zhuǎn)錄，避免了反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中出現(xiàn)錯(cuò)配的可能；同時(shí)，這個(gè)新方法還引入了磁珠分離技術(shù)，在進(jìn)行PCR前，通過(guò)結(jié)合有鏈霉親和素的磁珠對(duì)特異性標(biāo)記有生物素的靶標(biāo)序列進(jìn)行純化，大大提高了特異性。
