人凝血因子Ⅷ（FⅧ）Elisa試劑盒說明書
人凝血因子Ⅷ（FⅧ）Elisa試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T 20 U/L -480 U/L
使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中凝血因子Ⅷ（FⅧ）含量。
人凝血因子Ⅷ（FⅧ）Elisa試劑盒組成:
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶;
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（960 U/L） 0.5ml×1 瓶;
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶;
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份;
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張;
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個;
實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人凝血因子Ⅷ（FⅧ）水平。用純化的人凝血因子Ⅷ（FⅧ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入凝血因子Ⅷ（FⅧ），再與HRP 標記的凝血因子Ⅷ（FⅧ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的凝血因子Ⅷ（FⅧ）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人凝血因子Ⅷ（FⅧ）濃度。
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
480 U/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液;
240 U/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液;
120 U/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
60 U/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液;
30 U/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液;
2.加樣:分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將3 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定:以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算:以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值
大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
