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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于體外細菌內(nèi)毒素的檢測，禁止以任何途徑進入機體。本試劑盒  又稱鱟試劑，為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品。鱟試劑中  含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH 值及無干擾物質(zhì)），細菌內(nèi)毒素激活 C 因子，引起一系列酶促反應(yīng)，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。

產(chǎn)品特點：

1.可以用于定性檢測內(nèi)毒素。

2.靈敏度可以達到 0.06 EU/mL。

3.本產(chǎn)品足夠 10 次內(nèi)毒素半定量測定。

4.凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒只可用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

鱟試劑10 次安培瓶

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

常溫運輸，陰涼處避光 2-20℃保存，有效期兩年。

自備試劑

細菌內(nèi)毒素標準品、無內(nèi)毒素水。無內(nèi)毒素吸頭，無內(nèi)毒素玻璃試管（稀釋和反

應(yīng)用）。耐熱器皿可以 250℃干烤 30 分鐘去內(nèi)毒素。

使用方法：

一、待測樣品溶液的制備

1.待測樣品的 pH 值應(yīng)在 6.0–8.0 之間，若超出此范圍，需用無熱原緩沖液或 0.1N 氫氧化鈉、0.1N 鹽酸調(diào)節(jié)。若樣品中可能存在鱟實驗的干擾物質(zhì)，見本說明書第 13 點“樣品的干擾實驗"。若樣品中可能含有導(dǎo)致鱟試劑中G 因子旁路反應(yīng)的（1,3）β－D－葡聚糖，需選用不會對（1,3）β－D－葡聚糖起反應(yīng)的特異性鱟試劑。

二、細菌內(nèi)毒素標準溶液及對照液的準備(本試劑盒不提供內(nèi)毒素標準品）

2.取細菌內(nèi)毒素工作標準品 1 支，按其使用說明書配制 2?、1?、0.5?及 0.25? 的一系列內(nèi)毒素標準溶液（?為鱟試劑靈敏度標示值），備用。

3.準備陰性對照液，即無內(nèi)毒素水。

4.準備陽性對照液，即濃度為 2?的內(nèi)毒素標準溶液。

5.準備樣品陽性對照液，即添加濃度為 2?內(nèi)毒素標準的樣品溶液。三、內(nèi)毒素檢測

6.鱟試劑（本產(chǎn)品）的溶解：按標示量（本試劑盒為 0.1 mL/支）加 0.1 mL

無內(nèi)毒素水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑完-全溶解。注意不要引起氣泡，

溶解后的試劑應(yīng)在 10 分鐘內(nèi)使用（即配即用）。

7.樣品最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的計算： MVD＝ C×L/?

?：測試用鱟試劑靈敏度標示值(EU/mL)；L：待測樣品細菌內(nèi)毒素限值；C：待測樣品濃度或樣品復(fù)溶后所得樣品濃度。當 L 單位為 EU/mL 時，C 的單位為 1 mL/mL；當 L 單位為 EU/mg 或者 EU/U 時，C 的單位為 mg/mL 或者 U/mL。

8.按照計算所得體積，加無內(nèi)毒素水到待測樣品中得到制備樣品工作液。

9.在標記的反應(yīng)管中分別加入 0.1 mL 陰性對照液、0.1 mL 陽性對照液、0.1 mL 待測樣品陽性對照液、0.1 mL 待測樣品工作液，封閉管口，輕輕搖勻， 垂直放入 37℃的恒溫器中溫育 60 分鐘±2 分鐘，溫育期間避免振動。

10.將試管從恒溫器中輕輕取出，緩慢倒轉(zhuǎn) 180 度。若管內(nèi)的內(nèi)容物呈堅實凝膠， 不變形，不從管壁滑脫為陽性，記錄為（+）；若不呈凝膠或雖生成凝膠但不能保持完整并從管壁滑脫為陰性，記錄為（-）。

11.只有當陰性對照管結(jié)果均為陰性，陽性對照管、樣品陽性對照管結(jié)果均為陽  性，實驗方有效，否則無效，不需要分析待測樣品數(shù)據(jù)。若陰性對照管為陽  性，提示鱟試劑、無內(nèi)毒素水或?qū)嶒炂骶呖赡苁艿轿廴尽Ｈ絷栃詫φ展転殛?nbsp; 性，提示鱟試劑活性減失、內(nèi)毒素標準溶液效價降低，鱟試劑的靈敏度或內(nèi)  毒素的效價標示不準確，或內(nèi)毒素標準溶液的稀釋不正確。若樣品陽性對照  管為陰性，提示反應(yīng)體系內(nèi)有干擾因素存在。

四、其他常用實驗方案

12.鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗

當使用新批號的鱟試劑或?qū)嶒灄l件發(fā)生了任何可能影響檢驗結(jié)果的改變時，  應(yīng)按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗"進行實驗。按照下式復(fù)核靈敏度：?＝lg-1 (∑X/4)，當

0. 5 ?≤?≤2.0 ?時，鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，檢測時仍以標示靈敏度 ?為準。

13.樣品的干擾實驗

當鱟試劑、樣品的來源、配方、生產(chǎn)工藝或?qū)嶒灜h(huán)境中發(fā)生了任何有可能影  響實驗結(jié)果的變化時，須按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“干擾實驗"進行干擾實驗。具體方法是以待測樣品代替無內(nèi)  毒素水為溶劑，配制 2 ?、1 ? 、0.5 ?及 0.25 ?的內(nèi)毒素系列標準溶液進行靈敏度復(fù)核。若靈敏度復(fù)核值在 0.5?到 2?之間(包含 0.5 ?及 2 ?)，則認為在此實驗條件下樣品無干擾。若靈敏度復(fù)核值在 0.5 ?到 2 ?之外，則認為在此實驗條件下樣品有干擾，需對樣品進行稀釋（稀釋倍數(shù)不得超過最大  有效稀釋倍數(shù) MVD）或進行其它處理消除干擾。

14.凝膠限度實驗

凝膠限度實驗用于判斷樣品的內(nèi)毒素含量是否超過藥典所規(guī)定的細菌內(nèi)毒素限值。按《中華人民共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“凝膠限度實驗"進行實驗。在實驗有效的情況下，如果樣品管的兩個平行管均為陰性，判定樣品的內(nèi)毒素含量小于藥典規(guī)定限值。如果樣品管的兩個平行管均為陽性，判定樣品的內(nèi)毒素含量不符合藥典規(guī)定。如果樣品管的兩個平行管一管為陽性，另一管為陰性，需進行復(fù)試。復(fù)試時，樣品需做 4 個平行管，若所有平行管均為陰性，判定樣品符合規(guī)定，否則判定樣品不符合規(guī)定。

15.凝膠半定量實驗

本方法系通過確定反應(yīng)終點濃度來量化樣品中內(nèi)毒素含量。詳見《中華人民  共和國藥典》2010 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“凝膠半定量實驗"。

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