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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是 4×LAMP MasterMix（可視染料法）和免提取樣本 DNA 釋放劑的組合。前者含有可視化 LAMP 擴(kuò)增所需的所有成分，可以用于可視化 LAMP 等溫?cái)U(kuò)增。免提取樣本 DNA 釋放劑可用于處理各種樣品，直接不經(jīng)過(guò)提取直接用于 PCR 或 LAMP 擴(kuò)增。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每個(gè)成分。

2.不需要單獨(dú)進(jìn)行核酸純化，LAMP 擴(kuò)增后可以直接肉眼觀察，不需任何設(shè)備。

3.高特異性，精心優(yōu)化的可視化 LAMP MasterMix 配方，非特異擴(kuò)增比自配的 LAMP 試劑更低。

4.4×MasterMix，比對(duì)應(yīng)的 2×MasterMix 能使用能多的擴(kuò)增模板。如果樣品沒(méi)有抑制物，最多可使用 11uL 進(jìn)行擴(kuò)增，降低漏檢的機(jī)率。

5.高擴(kuò)增效率，一般比 PCR 靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)。

6.本試劑盒足夠 50 次免提取樣本處理和 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。

7.提供擴(kuò)增對(duì)照，便于在遇到困難時(shí)分析原因。

8.免提取 LAMP 試劑盒（可視染料法）只能用于科研，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

免提取 LAMP 試劑盒第 1 部分，規(guī)格 50 次，5 孔盒包裝，常溫運(yùn)輸和保存。

成 份規(guī) 格包 裝

免提取 DNA 模板制備

溶液 A 成分 10.1 mL0.5 mL 白蓋管

免提取 DNA 模板制備

溶液 A 成分 20.1 mL0.5 mL 紫蓋管

免提取 DNA 模板制備

溶液 B0.5 mL0.5 mL 綠色蓋

免提取 LAMP 試劑盒第 2 部分：規(guī)格 50 次，5 孔盒包裝，低溫運(yùn)輸，-20℃保存。

成 份規(guī) 格包 裝

4×LAMP MasterMix

（可視染料法，待加酶）200uL0.5mL 黃蓋管

Bst DNA 聚合酶50uL0.5mL 紅蓋管

陽(yáng)性對(duì)照模板-引物混合物50uL0.5mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè)1 份

保存和運(yùn)輸

第 1 部分常溫運(yùn)輸和保存，第 2 部分低溫運(yùn)輸，-20℃保存。有效期一年。

自備試劑

超純水、LAMP 模板、LAMP 引物

使用方法：

1.打開(kāi)金屬浴或 PCR 儀，把溫度調(diào)到 95℃。

2.配制 1mL 工作液（足夠 10 個(gè)樣品，如果樣品不止 10 個(gè)，需要按比例增加）：

在一干凈的 1.5mL 自備塑料離心管中加入 10uL 免提取模板制備溶液A 成分 1，20uL 免提取模板制備溶液 A 成分 2 和 970uL 超純水，充分混合均勻待用。溶液 A 工作液可室溫放置，但最好在一周內(nèi)用完。

3.標(biāo)記 10 個(gè) PCR 管（方便后續(xù)用 PCR 儀加熱保溫），分別加入 100 uL 上步所配制的溶液 A 工作液。

4.參考下表在管中加入待處理樣品。如果是固體樣品，需要確保固體樣品被溶液 A 工作液淹埋，如果是液體樣品則震蕩混勻即可。動(dòng)物組織 1-5 mg、鼠尾 2mm、血液樣品不超過(guò) 20 uL、植物葉片 1-5 mg、植物種子 1-5 mg、0.2-0.5mL微生物培養(yǎng)物離心所得的沉淀、血清血漿等蛋白濃度高的液體樣品 10-30 uL、其他液體樣品（如保存液中的病毒樣品）50-100 uL。對(duì)上表未列出的樣品，用戶需要自己摸索最佳用量。對(duì)富含多醌多酚的植物材料（如棉花），使用量最好不要超過(guò) 0.5mg。

5.在金屬浴或 PCR 儀上 95℃保溫 10 分鐘。

6.待冷卻到常溫。

7.每個(gè)管中加入 10uL 溶液 B 并輕柔吹打混勻得 DNA 釋放液。這些 DNA 釋放液足夠進(jìn)行 50-100 次 PCR 或 LAMP 擴(kuò)增。

8.配制5×LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級(jí)別的下列引物干粉稀釋到標(biāo)準(zhǔn)所標(biāo)注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，最  后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足夠250次20uL體系的LAMP 擴(kuò)增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液體積異于1mL，則各成分的用量 請(qǐng)按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

引物名稱(chēng)母液濃度加母液量在 5×LAMP 引物

混合液中的濃度

FIP 引物100 uM80 uL8 uM

BIP 引物100 uM80 uL8 uM

F3 引物100 uM10 uL1 uM

B3 引物100 uM10 uL1 uM

Loop F100 uM20 uL2 uM

Loop B100 uM20 uL2 uM

超純水780 uL

終體積1 mL

注：如果沒(méi)有Loop引物，則用水替代。

9.在冰上融化4×LAMP MasterMix（可視化法），混勻，稍離心。第一次使用時(shí)，請(qǐng)將50uL Bst DNA聚合酶全部加入到4×LAMP MasterMix中輕柔混勻，然后再使用。如果有N個(gè)樣品，則在N+2個(gè)反應(yīng)管中加入以下組份，多出的一管是LAMP擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照（PC），一管是LAMP擴(kuò)增陰性對(duì)照（NC）：

10.混勻，置于65℃保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴或水浴保溫，沒(méi)有熱蓋，必須覆蓋50uL的石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)  體系的水分會(huì)蒸發(fā)，嚴(yán)重影響反應(yīng)效率。

11.擴(kuò)增結(jié)束后肉眼觀察結(jié)果判斷陰性和陽(yáng)性。典型的結(jié)果見(jiàn)下圖：左邊管為陰  性，右邊兩個(gè)管為陽(yáng)性。

12.結(jié)果分析：如果本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照-引物混合物呈現(xiàn)陽(yáng)性而陰性對(duì)照  為陰性，則實(shí)驗(yàn)有效。如果陽(yáng)性對(duì)照-引物混合物呈現(xiàn)陰性，則操作有問(wèn)題  或者試劑盒有問(wèn)題，請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。如果陰性對(duì)照（水作為模板）也呈現(xiàn)陽(yáng)  性，則說(shuō)明LAMP樣品或試劑有過(guò)去的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，需要注意操作的規(guī)范性，如果不能解決，可以重新設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增新的靶片段。

13.也可以電泳檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（強(qiáng)烈不推薦此法，因?yàn)殡娪緯r(shí)產(chǎn)生的氣溶膠非常  容易污染環(huán)境，使得今后用同一引物擴(kuò)增時(shí)產(chǎn)生假陽(yáng)性）：取5-10uL擴(kuò)增產(chǎn)物和自備的上樣液混合，上樣，進(jìn)行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有LAMP擴(kuò)增

的樣品將可見(jiàn)LAMP特征性電泳圖譜。

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