游離膽gu醇（free cholesterol, FC）含量測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

游離膽gu醇含量測(cè)定試劑盒 脂肪酸系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

FC 是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，也是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素 D 等生理活性物質(zhì)的重要原料。FC 濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。

測(cè)定原理：

FC 氧化酶催化FC 生成△4-膽甾烯酮和H2O2，過氧化物酶催化 H2O2、4-氨基安ti比林和酚生成紅色醌類化合物，在 500nm 有吸收峰，其顏色深淺與FC 含量成正比。

組成：

TC 標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1ml×1 支，0.5μmol/ml，4℃保存。

自備儀器和用品：

水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96 孔板、異丙醇和蒸餾水。

FC 的提?。?/span>

組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

細(xì)菌、真菌：先收集 400-500 萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1ml 試劑一，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度 20％，超聲 2s，停 1s），即FC 待測(cè)液。

血清（漿）樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 500 nm。

FC 工作液的配制：臨用前，吸取約 0.8ml 試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，F(xiàn)C 工作液置于 37℃水浴 10min。用不完的工作液 4℃保存一周。

標(biāo)準(zhǔn)管：依次在 96 孔板中加入 20μl FC 標(biāo)準(zhǔn)液和 180μl FC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于500nm 測(cè)定A 標(biāo)準(zhǔn)管。

測(cè)定管：依次在 96 孔板中加入 20μl FC 待測(cè)液和 180μl FC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測(cè)定A 測(cè)定管。

5、空白管：依次在 96 孔板中加入 20μl 試劑一和 180μl FC 工作液，混勻，37℃靜置 3h 后于 500nm 測(cè)定A 測(cè)定管。

注意事項(xiàng)：

1、標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。

2、若測(cè)定管產(chǎn)生白色渾濁，可以將待測(cè)液用異丙醇稀釋 2~5 倍后測(cè)定，并在最后結(jié)果乘以相應(yīng)倍數(shù)。計(jì)算公式：

血清（漿）中FC 含量計(jì)算：

FC 含量（μmol /dL）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×100ml

=50×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。

組織中FC 含量計(jì)算：

按樣本蛋白濃度計(jì)算

FC 含量（μmol / mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

= 0.5×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

按樣本鮮重計(jì)算

FC 含量（μmol / g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

= 0.5×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml

細(xì)胞、細(xì)菌中FC 含量計(jì)算：

FC 含量（μmol /104 cell）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell

/L）=0.5×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L） C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml。

最di檢出限為 1nmol/ml。

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