NobleRyder BC1618 Caspase-3 活性檢測(cè)試劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1618

產(chǎn)品名稱(chēng)：Caspase-3 活性檢測(cè)試劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit

英文名稱(chēng)：Caspase-3 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T/20T

Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞凋亡

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

檢測(cè)方法：比色法 Colorimetric

儲(chǔ)存條件：Store at -20℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC1618 Caspase-3 活性檢測(cè)試劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的蛋白酶家族，包含I0多個(gè)成員。Caspase-3 是凋亡過(guò)程中最主要的終末蛋白酶,也是研究最多 caspase;它激活 pro-caspase-2,6,7,9特異水解多種關(guān)鍵凋亡蛋白如PARP，介導(dǎo)染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核 DNA 斷裂。

測(cè)定原理基于Caspase-3 特異水解多肽底物 DEVD-pNA(Asp-Gu-Val-Asp-p-nitroanilide),釋放的游離硝基苯胺 pNA在: 405nm 有最大吸收峰。采用可見(jiàn)光光度比色法測(cè)定pNA而得到Caspase 活性。適用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞 Caspase-3 活性。

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、100mL玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1.培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管，離心后棄上清:按照細(xì)胞數(shù)量(約106個(gè))加 100L 試劑二(若裂解不充分可提高至 150-200μL),震蕩重懸沉淀，置冰上靜置15 min,15000g49C離心 10-15min,取上清置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑二體積(mL)為1:5-~10的比例(建議稱(chēng)取約01g組織，加入1mL試劑二)，冰浴研磨或充分剪碎，置冰上靜置15min，4℃，15000g離心10-15min，取上清置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將5mmolLpNA 標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋至 200、100、50、25、12.5、0umolL,的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

注意事項(xiàng):

1、由于試劑二中含有還原劑(DTT)，建議將樣本用水稀釋2倍后，用Bradford 法測(cè)定蛋白濃度，以降低 DTT對(duì)蛋白濃度測(cè)定的下擾。不建議使用 BCA法測(cè)定蛋白濃度。

Caspase 活性測(cè)定值低最常見(jiàn)的原因是細(xì)胞未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少，其次是觀測(cè)時(shí)間不恰當(dāng)。誘導(dǎo)凋亡時(shí)，2、并非劑量越大時(shí)間越長(zhǎng) Caspase 活性就越高。建議設(shè)置不同劑量和時(shí)間點(diǎn)如0、2、4、8、16、24小時(shí)，以檢測(cè)優(yōu)良的觀察點(diǎn)。

3、所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限shi，可用試劑二稀釋樣本后重新測(cè)定。

4、蓋緊 96 孔板蓋子并用封口膜密封。37℃孵育，肉眼可見(jiàn)顏色變黃時(shí)的OD405值約為0.2，此時(shí)即可測(cè)定。顏色變化不明顯可延長(zhǎng)反應(yīng)或過(guò)夜，但酶活性較強(qiáng)時(shí)，孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)將導(dǎo)致反應(yīng)失去線性關(guān)系。

Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞凋亡 

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BC1618 Caspase-3 活性檢測(cè)試劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit  50T/100T/20T