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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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一、產(chǎn)品概述
Roche LightCycler 480 是一款適用于中高通量實(shí)驗(yàn)室的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qPCR）平臺(tái)，支持 96 孔和 384 孔板兩種格式。其模塊化設(shè)計(jì)結(jié)合高精度溫控與多通道熒光檢測(cè)，可靈活配置實(shí)驗(yàn)方案，并兼容多種熒光染料和探針。LightCycler 480 廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)、表觀遺傳學(xué)研究、SNP 分型及拷貝數(shù)變異檢測(cè)等領(lǐng)域。
二、系統(tǒng)架構(gòu)與硬件組成
機(jī)箱與尺寸
外殼采用金屬與抗腐蝕涂層，尺寸約 50 cm×58 cm×54 cm，適合實(shí)驗(yàn)臺(tái)或安裝架放置；
凈重約 30 kg，設(shè)計(jì)有可拆卸頂蓋，便于維護(hù)與清潔。
溫控模塊
半導(dǎo)體制冷加熱（Peltier）技術(shù)，支持 4 °C–99 °C 溫度范圍；
溫度控制精度 ±0.1 °C，均一性 ≤ 0.2 °C；
升溫速率最高可達(dá) 4 °C/s，降溫速率約 3 °C/s。
光學(xué)檢測(cè)單元
激發(fā)源：多色 LED，包括藍(lán)（470 nm）、綠（530 nm）、黃（590 nm）和紅（630 nm）光區(qū)；
檢測(cè)器：光電二極管陣列（PMT），信噪比可達(dá) 1:1000；
通道切換：自動(dòng)濾光片切換，延遲 < 8 ms；
支持 FAM、HEX/VIC、ROX/TAMRA、Cy5、Cy3 等多種染料組合。
板式適配
標(biāo)配 96 孔板架；可選配 384 孔板適配器，單次檢測(cè)量提升 4 倍；
兼容條管、單管及定制微流控芯片。
控制與接口
高分辨率觸摸屏面板，實(shí)時(shí)顯示擴(kuò)增曲線與熔解曲線；
PC 端軟件通過 USB 2.0、LAN 或 RS-232 接口連接；
支持遠(yuǎn)程監(jiān)控與實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS）對(duì)接。
三、關(guān)鍵性能指標(biāo)
| 性能指標(biāo) | 技術(shù)參數(shù) |
|---|---|
| 溫度控制精度 | ±0.1 °C |
| 溫度均一性 | ≤ 0.2 °C |
| 最大升溫速率 | 4 °C/s |
| 最大降溫速率 | 3 °C/s |
| 熒光通道數(shù) | 最多 5 通道（可選） |
| 檢測(cè)靈敏度 | 單拷貝水平 |
| 定量線性范圍 | 101–10? copies |
| 線性回歸系數(shù) (R2) | ≥ 0.995 |
| 板式通量 | 96 孔/板（標(biāo)配），384 孔/板（選配） |
| 數(shù)據(jù)輸出格式 | CSV、Excel、PDF、JPEG、PNG |
| 通訊接口 | USB 2.0 ×2，LAN ×1，RS-232 ×1 |
| 電源要求 | AC 100–240 V，50/60 Hz |
| 工作環(huán)境 | 溫度 15–30 °C，濕度 20–80% （無冷凝） |
| 功耗 | 工作時(shí) ≤ 250 W；待機(jī) ≤ 10 W |
四、軟件平臺(tái)與數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
向?qū)浇缑嬉龑?dǎo)設(shè)置板架布局、引物/探針通道及擴(kuò)增程序；
支持梯度 PCR 設(shè)計(jì)，一次試驗(yàn)可同時(shí)測(cè)試 6–12 個(gè)退火溫度；
模板管理功能，可保存、導(dǎo)入、導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)?zāi)０?，減少重復(fù)操作。
實(shí)時(shí)監(jiān)控
實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線與 Ct 值自動(dòng)計(jì)算；
多種顯示模式（疊加模式、分組對(duì)比模式）便于多板實(shí)驗(yàn)評(píng)估；
實(shí)時(shí)熔解曲線、熒光強(qiáng)度變化曲線。
數(shù)據(jù)處理
定性分析：閾值循環(huán)數(shù)（Ct）判定，自動(dòng)篩選異常點(diǎn)；
相對(duì)定量：ΔΔCt 法或 Pfaffl 法，預(yù)設(shè)多種內(nèi)參基因庫；
絕對(duì)定量：標(biāo)準(zhǔn)曲線法，支持自動(dòng)繪制并擬合；
多重分析：不同通道熒光分離，支持最多 4–5 重檢測(cè)；
熔解曲線分析：可視化產(chǎn)物特異性，檢測(cè)引物二聚體或非特異擴(kuò)增。
報(bào)告與導(dǎo)出
自定義報(bào)告模板，包含實(shí)驗(yàn)信息、圖表和統(tǒng)計(jì)匯總；
批量導(dǎo)出功能，一鍵生成多實(shí)驗(yàn)報(bào)告；
數(shù)據(jù)加密與用戶權(quán)限管理，滿足 GLP/GMP 規(guī)范需求。
五、典型應(yīng)用領(lǐng)域
基因表達(dá)定量
適用于細(xì)胞因子、受體、轉(zhuǎn)錄因子等基因表達(dá)差異分析；
熒光染料與探針雙重標(biāo)記，針對(duì)低豐度轉(zhuǎn)錄本也可獲得穩(wěn)定 Ct 值。
病原體核酸檢測(cè)
病毒、細(xì)菌、真菌等病原微生物定性與定量；
可配置快速擴(kuò)增程序，初步結(jié)果可在 30–40 min 內(nèi)獲取。
拷貝數(shù)變異與 SNP 分型
使用 TaqMan 探針或 HRM（高分辨率熔解曲線）技術(shù)；
定量檢測(cè)基因組擴(kuò)增或缺失事件，支持 CNV 分析；
基于熔解曲線差異識(shí)別單核苷酸多態(tài)性（SNP）。
表觀遺傳學(xué)分析
甲基化特異 PCR（MSP）與甲基化敏感探針分析；
結(jié)合亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換后 DNA，定量評(píng)估甲基化水平。
轉(zhuǎn)基因及 GMO 檢測(cè)
針對(duì)常見轉(zhuǎn)基因片段（35S、NOS、Bar 等）進(jìn)行定量；
符合食品安全和監(jiān)管機(jī)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)，如 ISO 21569。
六、日常操作與維護(hù)
開關(guān)機(jī)流程
開機(jī)：連接電源與網(wǎng)絡(luò)，啟動(dòng)軟件后執(zhí)行系統(tǒng)自檢；
關(guān)機(jī)：在軟件中安全退出后斷電，避免數(shù)據(jù)丟失。
試劑與耗材
推薦使用低漂白或無漂白板材及專用封板膜；
熒光探針、引物等反應(yīng)體系需在 ?20 °C 存儲(chǔ)并在室溫平衡后使用。
清潔與消毒
每次實(shí)驗(yàn)后，用無塵布或鏡頭紙擦拭光學(xué)窗口；
定期用 70% 乙醇擦拭樣本架底板及蓋板；
避免液體進(jìn)入機(jī)箱風(fēng)道和電子部件。
校準(zhǔn)與質(zhì)控
溫度校準(zhǔn)：每 6 個(gè)月使用校準(zhǔn)板或標(biāo)準(zhǔn)試劑驗(yàn)證；
光學(xué)校準(zhǔn)：采用標(biāo)準(zhǔn)熒光染料，檢查各通道靈敏度與線性度；
軟件更新：定期檢查并安裝新版固件與分析軟件。
故障排查
軟件錯(cuò)誤：參考日志文件或重安裝軟件；
硬件報(bào)警：根據(jù)錯(cuò)誤代碼手冊(cè)執(zhí)行清潔或更換部件；
無法升溫或溫差過大：檢查 Peltier 模塊及散熱風(fēng)扇。
七、二手設(shè)備驗(yàn)收要點(diǎn)
外觀與機(jī)械部件
檢查機(jī)箱無明顯碰撞痕跡；
樣本架與蓋板運(yùn)動(dòng)順暢，無卡滯。
溫控與光學(xué)測(cè)試
執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)梯度 PCR，記錄升降溫曲線與均一性；
利用熒光板及陰性對(duì)照檢測(cè)信噪比與線性范圍。
軟件功能驗(yàn)證
創(chuàng)建新實(shí)驗(yàn)、加載模板、運(yùn)行擴(kuò)增并導(dǎo)出報(bào)告；
檢查網(wǎng)絡(luò)連接和遠(yuǎn)程監(jiān)控功能。
配件與文檔
樣本架、封板膜、電源線、通信線、軟件授權(quán)文件齊全；
提供最近一次校準(zhǔn)報(bào)告及使用手冊(cè)。
八、典型用戶案例
大學(xué)與研究所：
在腫瘤標(biāo)志基因表達(dá)分析項(xiàng)目中，同步比較 20+ 個(gè)基因，月平均運(yùn)行 200 板次，結(jié)果重現(xiàn)性良好。第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)：
用于轉(zhuǎn)基因作物成分定量分析，滿足 ISO/IEC 17025 認(rèn)證。公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室：
實(shí)施呼吸道病原體監(jiān)測(cè)，流感高峰期單日檢測(cè)可達(dá) 800 例樣本。
九、采購及配件建議
通量選擇
日常通量 < 50 板/月：標(biāo)準(zhǔn) 96 孔版；
通量 > 200 板/月：建議選配 384 孔適配器及自動(dòng)上板裝置。
配件選配
梯度模塊：用于引物退火溫度優(yōu)化；
自動(dòng)化接口：與液體處理機(jī)器人對(duì)接，減少手動(dòng)操作。
軟件授權(quán)
標(biāo)配基礎(chǔ)分析模塊；
可選 LIMS 接口、統(tǒng)計(jì)插件（PCA、聚類分析等）。
預(yù)算考量
全新機(jī)型與二手設(shè)備在初期投入有差異；
建議根據(jù)項(xiàng)目周期與預(yù)算綜合評(píng)估。
十、售后與技術(shù)支持
質(zhì)保期
核心部件（溫控、光學(xué)） 6 個(gè)月；
耗材及附件 3 個(gè)月。
培訓(xùn)服務(wù)
包括儀器安裝、軟件操作、日常維護(hù)與故障排查；
可安排現(xiàn)場(chǎng)或遠(yuǎn)程培訓(xùn)。
技術(shù)支持
遠(yuǎn)程診斷：實(shí)時(shí)監(jiān)控運(yùn)行狀態(tài)；
現(xiàn)場(chǎng)服務(wù)：簽訂協(xié)議后 48 小時(shí)內(nèi)響應(yīng)（限主要城市）；
定期校準(zhǔn)與升級(jí)服務(wù)套餐亦可選購。
通過系統(tǒng)化的硬件設(shè)計(jì)、軟件功能和多領(lǐng)域應(yīng)用驗(yàn)證，LightCycler 480 能滿足科研、臨床及檢測(cè)機(jī)構(gòu)的多種需求。
