目錄:柏萊源（天津）生物科技有限公司>>生物試劑>>試劑盒kit>> HG-TP001-2GT7 RNA Polymerase ELISA 檢測試劑盒（2G）
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
貨號：HG-TP001-2G
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）法，將T7 RNA Polymerase標準品和待測樣本加入預包被抗T7 RNA Polymerase抗體的酶標板，然后加入稀釋后的生物i素標記的檢測抗體和Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP復合物，洗板后加入TMB顯色液顯色。TMB在HRP酶的催化下由無色轉(zhuǎn)化成藍色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的T7 RNA Polymerase的量呈正相關(guān)。
檢測范圍：0.25 ~ 16 ng/mL
定 量 限：0.25 ng/mL
檢 測 限：0.012 ng/mL
精 密 度：CV% < 10%, RE% < 士15%
96T
適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測。
| 組分 | 規(guī)格 | 配制 |
| 標準品(Standard) | 32 ng×6管 | 建議按稀釋方式操作 |
| 包被酶標板(Coated Plate) | 8孔×12條 | 即用型 |
| 樣品稀釋液(Sample Diluent Buffer) | 15mL×4瓶 | 即用型 |
| 濃縮洗液(Wash Buffer 10×) | 50 mL×1瓶 | 用去離子水進行10倍稀釋 |
| 檢測抗體(Detection Antibody 100×) | 65μL×1管 | 用抗體稀釋液進行100倍稀釋 |
| 抗體稀釋液(Antibody Diluent Buffer) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
| TMB顯色液(TMB Substrate) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
| 終止液(Stop Solution) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
| 封板膜(Sealing film) | 5張 | 即用型 |
| 說明書 | 1份 | 即用型 |
備 注:未開封試劑盒，在2~8℃條件下有效期為12個月。
◆酶標儀
◆去離子水
◆微孔板恒溫振蕩器
◆全新濾紙
◆微量移液器及吸頭
◆渦旋振蕩器
實驗前準備
1.所有試劑以及待測樣本需要恢復室溫（18~25°C）。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用
2.1×洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18~25℃），不要有結(jié)晶?；靹蚝蟾鶕?jù)用量，取適量去離子水按1：9的比例，將10×洗液稀釋10倍，最終得到1×洗液。
3.1×檢測抗體配制：計算實驗所需工作液體積，取適量100×檢測抗體，用抗體稀釋液按1：99稀釋，充分混勻備用。
4.標準品的配制:取一支標準品，加200 μL去離子水，渦旋混勻，終濃度為160 ng/mL;取60uL濃度為160ng/mL標準液，加至540uL樣品稀釋液，渦旋混勻，終濃度為16ng/mL，用移液器將300uL樣品稀釋液移至每個離心管中，再按照下圖進行1:1梯度梯度稀釋。
5. 樣品使用樣品稀釋液進行稀釋，稀釋后的樣品即為：樣品稀釋工作液。
操作步驟
使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫（18~25°C）。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。
1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
2.根據(jù)實驗孔數(shù)量，確定所需的板條數(shù)目，剩余板條放回鋁箔袋，密封。
3.加樣與檢測抗體工作液:每孔加入100μL標準品、樣品稀釋工作液、陰性對照至相應孔中。每孔加1x檢測抗體50uL。用封板膜封板后置37°C恒溫震蕩培養(yǎng)箱，600-800rpm，溫育60分鐘。
4.洗滌:棄去各孔內(nèi)液體，用1x洗液注滿微孔(300 uL/孔)，靜置30秒后棄去孔內(nèi)液體;重復3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。
5.顯色:每孔分別加100 μL底物顯色液，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置25℃℃顯色15分鐘。
6.測定:每孔加終止液100 L，輕微混勻。選擇酶標儀主波長450nm，參考波長630nm，測定各孔吸光值(OD值)。
結(jié)果處理
1.標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）
| 標準品濃度(ng/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
| 16 | 2.8708 | 2.9433 | 2.9071 |
| 8 | 2.0941 | 2.0731 | 2.0836 |
| 4 | 1.2382 | 1.2562 | 1.2472 |
| 2 | 0.7254 | 0.6866 | 0.7060 |
| 1 | 0.3880 | 0.3634 | 0.3757 |
| 0.5 | 0.2124 | 0.1877 | 0.2001 |
| 0.25 | 0.1233 | 0.117 | 0.1202 |
| 0.00 | 0.0393 | 0.0422 | 0.0408 |
2.標準品理論濃度與對應OD值以四參數(shù)進行擬合，得到標準曲線（如下圖所示）。
1.樣品首i次檢測，建議進行至少3個連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標曲范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個稀釋后樣品。
2.試劑按標簽說明儲存，使用前室溫平衡。
3.包被酶標板使用前請平衡至室溫再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其他不用的試劑應包裝好或蓋好。
4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑的稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻?qū)嶒灲Y(jié)果尤為重要。
6.洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾放入反應孔中吸水。
7.底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。
8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請在效期內(nèi)使用。
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