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1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。

2.步驟：免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）、熒光或放射性標記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識別信號。后利用信號強度，標準樣品濃度梯度等信息計算得出待測樣中目標抗原的濃度。

3.分類：根據免疫識別和信號輸出方式的不同，ELISA可以分為雙抗體夾心法、直接免疫競爭法和非直接免疫競爭法等等。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應用上常見。

人阿法骨化醇(Alfacalcidol)ELISA試劑盒注意事項：

1.所有的操作過程一般都用排槍處理，在操作過程中，排槍吸兩檔打一檔，會防止氣泡的產生，并且操作時一定要保證槍頭每步都要插緊，選擇配套的槍頭尤為重要，槍頭容易掉，影響實驗效果，此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊，避免槍頭松動自己卻不知。

2.在處理稀釋標準品的過程中，要在渦旋儀上點一下，使混勻，但振蕩過程不宜過長，防止出現蛋白質降解變性的現象

3.二抗的稀釋濃度對顯色效果起著至關重要的作用，每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗是每一次都做一個預實驗，設置不同的二抗?jié)舛群惋@色時間，從而確定相應的條件，方可做好大規(guī)模的篩選細胞工作。

4.同種細胞株的ELISA孵育時間要保持一致，降低無關變量的影響。

5.各種抗體的保存是在-80度冰箱，一定要將降低凍融次數，蛋白比較敏感，凍融次數多，蛋白活性就會降低。

6.稀釋樣品時一定要保證混勻，槍尖在液面以下吹打相同的次數，可防止出現氣泡。

7.分析數據的過程中，一般至少要5個點，不然數據沒有相應的說服力。

8.96孔板取完樣品后，蓋好，提早加好DPBS稀釋液，防止時間過長，樣品揮發(fā)，濃度不準。
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