冷凍保存是保存細(xì)胞或組織以備將來(lái)使用的一種重要的技術(shù)。最常見(jiàn)和可靠的冷凍保存方法之一是使用二甲基亞砜(DMSO)作為冷凍保護(hù)劑。
為什么是DMSO？
由于其在冷凍和解凍過(guò)程中保護(hù)細(xì)胞的能力，DMSO被廣泛用作冷凍保護(hù)劑。它對(duì)多種細(xì)胞類型的冷凍保存有效，包括血細(xì)胞、干細(xì)胞和其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞。它可以穿透細(xì)胞膜，以防止冰晶的形成。DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性很低，但它可以溶解和滲透可能具有細(xì)胞毒性的化合物。此外，過(guò)高濃度的DMSO會(huì)溶解細(xì)胞膜。當(dāng)使其作為冷凍保護(hù)劑時(shí)，仍須小心。
如何使用DMSO?
冷凍細(xì)胞的過(guò)程涉及幾個(gè)關(guān)鍵步驟，需要遵循這些步驟以確保細(xì)胞在解凍后保持活力。以下是一個(gè)循序漸進(jìn)的指南：
1.培養(yǎng)：在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，直到達(dá)到所需的融合度。
2.準(zhǔn)備冷凍培養(yǎng)基：市場(chǎng)上有多種類型的冷凍培養(yǎng)基，為特定細(xì)胞類型選擇合適的培養(yǎng)基很重要。冷凍介質(zhì)應(yīng)含有適當(dāng)濃度的DMSO或其他冷凍保護(hù)劑，以在冷凍過(guò)程中保護(hù)細(xì)胞。DMSO的濃度可以根據(jù)細(xì)胞類型而變化，但典型的濃度在5-10%之間。
不同類型的細(xì)胞可能需要不同的冷凍保護(hù)劑或不同濃度的DMSO。其他常見(jiàn)冷凍保護(hù)劑包括甘油、乙二醇和血清。選擇正確的冷凍介質(zhì)對(duì)成功冷凍保存細(xì)胞至關(guān)重要。在選擇冷凍介質(zhì)時(shí)，重要的是要考慮細(xì)胞類型、細(xì)胞大小和膜滲透性等因素。某些細(xì)胞類型可能需要特定的添加劑或較低濃度的DMSO來(lái)避免毒性。
此外，對(duì)于某些應(yīng)用，無(wú)血清培養(yǎng)基可能是優(yōu)選的，以降低污染或免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。確保遵循特定細(xì)胞類型的推薦方案，并選擇高質(zhì)量的冷凍培養(yǎng)基，以確保獲得最佳效果。
3.清洗：用緩沖液清洗細(xì)胞，去除任何可能干擾冷凍保存過(guò)程的微量血清或其他污染物。
4.加入冷凍培養(yǎng)基：將冷凍培養(yǎng)基加入細(xì)胞中，輕輕混合，確保細(xì)胞被均勻覆蓋。
5.轉(zhuǎn)移容器：將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)睦鋬鋈萜?，如螺旋頂部冷凍瓶。由于冷凍過(guò)程中的膨脹，建議將液體填充至小瓶體積的一半。
6.冷凍細(xì)胞：冷凍過(guò)程應(yīng)緩慢進(jìn)行，以盡量減少對(duì)細(xì)胞的損傷。使用速率可控的冷凍器，確保冷凍細(xì)胞的速率一致。以-1°C/min的速度冷凍細(xì)胞，直到達(dá)到-80°C。
7.儲(chǔ)存細(xì)胞：一旦細(xì)胞被冷凍，就可以將其儲(chǔ)存在液氮冷凍柜中，直到需要為止。
