1.污染

Q：以下圖片中的細胞是否已污染？這些小黑點，PBS沖洗能去掉大部分，但第二天會重新出現(xiàn)。

A：圖中的細胞存在微生物污染，在細胞與細胞間隙之間，有大量的小黑點聚集，且形狀基本上都是規(guī)則的顆粒狀。

當使用PBS沖洗時，能洗掉大部分，但卻無法全部清楚，因為只要殘留極少量的微生物，還是會繼續(xù)繁殖的。

從問題描述來看，PBS沖洗后第二天黑點就重新出現(xiàn)，憑這一點就可以輔助我們進行判斷——這是微生物污染。如果PBS沖洗后，黑點不再出現(xiàn)，那么黑點可能只是培養(yǎng)物碎片/雜質，但如果會不斷增加、無法全部清除，就肯定是污染。

有同學可能會疑惑，我不是在培養(yǎng)基中加了雙抗么，為什么還會污染呢？

雙抗，能抑制微生物增殖，但無法全部殺滅微生物。當污染達到一定程度后，雙抗也就無法繼續(xù)抑制它們的增殖，而隨后，你就能在顯微鏡下看到微生物污染了。此時，雙抗對微生物的影響已經失效。

對于上圖的細胞，我們只能扔棄，避免其波及其他培養(yǎng)瓶內的細胞。

相應的，這里也貼出一張正常狀態(tài)、沒有微生物污染的細胞，在視野內細胞與細胞的間隙是很干凈的，沒有黑點、桿狀、絲狀物，細胞也基本上是完好無損的，沒有解體的細胞。

2.傳代

Q：以下圖中的細胞狀態(tài)正常嗎？繼續(xù)培養(yǎng)還是消化傳代？

A：圖中的細胞密度已經達到了100%，細胞與細胞之間已經沒有任何空隙，所以我們看到這些細胞都擠成一堆了，它原本是什么形態(tài)的根本無法觀察出來。

當細胞的密度達到100%時，細胞就會與周圍的細胞全部貼合在一起，產生“接觸抑制"，表現(xiàn)為停止增殖，隨后就是細胞狀態(tài)開始下滑——進入衰退。

如果拿這個狀態(tài)的細胞去做實驗，效果會受到影響。大家要盡量避免細胞長得太密才進行消化傳代。以下是我們之前提供過的一張細胞密度示意圖。一般來說，80%-90%的密度就可以消化了。

3.復蘇

Q：以下圖中的細胞是復蘇后第二天的，細胞（貼壁生長的）還活著嗎？

A：復蘇后的細胞，如果是貼壁生長的，一般種入培養(yǎng)器皿后大約10-16小時就可以貼壁生長了。

解凍的過程也要盡快完成，可以嘗試拿一個塑料薄膜手套裝著凍存管，然后鑷子夾住管子和薄膜手套部分，深入水中不斷搖晃，觀察到管內已經全是液體后，立即停止并盡快進入下一步操作。

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