常見問題分析：

不長克隆

1. 片段類型錯誤：只兼容 PCR 擴增產(chǎn)物，且引物 5’端不可磷酸化修飾；
2. 片段投入不符合要求：片段應當切膠回收，且回收濃度不低于 30ng/μl；濃度過高時需稀釋使用，保證體系各組分投入體積不小于 1μl；片段投入量應按照說明書公式計算；
3. 連接反應不適當：反應應在 PCR 儀中進行，溫度可設置 25 或 37°C，連接時間可從 5min延長至 30min。

空載體 / 假陽性
1. PCR 擴增產(chǎn)物不單一：優(yōu)化 PCR 體系，提高特異性；對目的片段切膠回收；鑒定更多單克?。?br role="presentation" style="padding: 0px; margin: 0px; color: transparent; position: absolute; white-space: pre; cursor: text; transform-origin: 0% 0%;"/>2. 片段投入不符合要求：片段應當切膠回收，且回收濃度不低于 30ng/μl；濃度過高時需稀釋使用，保證體系投入體積不小于 1μl；片段投入量應按照說明書公式計算；
3. 連接反應不適當：反應應在 PCR 儀中進行，溫度可設置 25 或 37°C，連接時間可從 5min延長至 30min；
4. 菌液 PCR 用酶不適合：PCR 酶活應當不受雜質(zhì)影響，引物不應選擇插入片段 PCR 用引物進行檢測。

測序突變
1. 測序克隆數(shù)過少：測序單克隆數(shù)只有 1 個時，測序信息部分可信，建議多測幾個單克隆，檢查突變處的測序信號是否有問題，突變是否從模板引入；
2. 突變位置：若堿基突變位于引物處，建議重新合成引物再次實驗；位于其他部位的突變，應當使用高保真酶重新制備模板再次實驗。

測序片段不正確
1. PCR 擴增產(chǎn)物不單一：優(yōu)化 PCR 體系，提高特異性；對目的片段切膠回收；鑒定更多單克?。?br role="presentation" style="padding: 0px; margin: 0px; color: transparent; position: absolute; white-space: pre; cursor: text; transform-origin: 0% 0%;"/>

2. 模板存在 Amp/kana 抗性的質(zhì)粒：對目的片段進行切膠回收。

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深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務。可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務