MFC(小鼠胃癌細胞)特點：
1. 細胞貼壁較弱
該細胞貼壁比較弱，因此在遇到運輸?shù)蜏丶罢鹗?、室溫靜置太長時間、添加的培養(yǎng)基或其他試劑過冷、密度較高、聚集未吹散、加液吹打到細胞面等情況時會出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象，此時若脫落現(xiàn)象不嚴(yán)重應(yīng)盡快放回培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，若呈大片脫落的情況時需要收集細胞重新消化吹散并接種。
2. 細胞生長較快
培養(yǎng)時應(yīng)加入足量的培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基營養(yǎng)快速耗盡導(dǎo)致細胞脫落或狀態(tài)變差。注意關(guān)注培養(yǎng)基顏色變化和細胞密度，及時換液。注意控制細胞密度，過高或過低都可能影響細胞狀態(tài)，不要長時間高密度培養(yǎng)。
3. 消化時間控制
消化時間偏短，注意控制消化時間，控制消化時間見細胞傳代攻略。
MFC細胞收貨攻略
常溫細胞
1. T25瓶收貨后，拆開外包裝，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培養(yǎng)箱靜置2-4h。
2. 吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 ml，顯微鏡下拍照保存細胞狀態(tài)照片，觀察細胞密度，若細胞密度大于80%即可按比例傳代（首C傳代比例建議1：2），若細胞密度低于70%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度80%以上再進行傳代培養(yǎng)。
凍存細胞
1. 細胞收貨后盡快開箱檢查，若干冰充足可以取出細胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天內(nèi)復(fù)蘇）短期保存或液氮中長期保存，若干冰完Q揮發(fā)建議立即復(fù)蘇細胞并聯(lián)系銷售人員解決。
2. 凍存細胞建議盡快復(fù)蘇一管培養(yǎng)檢查，以免超出售后期，復(fù)蘇步驟參考復(fù)蘇攻略。
3. 復(fù)蘇一管細胞出現(xiàn)異常及時聯(lián)系銷售人員，在專業(yè)技術(shù)支持的指導(dǎo)下進行下一步操作。
MFC細胞傳代攻略
1. 先盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基，再加3-4ml 提前預(yù)熱的PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS。
2. T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層，將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱消化。
3. 消化到細胞間隙變大，部分細胞完Q脫落時加2-3ml完Q培養(yǎng)基終止胰酶消化。
4. 混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清。
5. 加新的完Q培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里，補足完Q培養(yǎng)基，最后將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
MFC細胞凍存攻略
凍存步驟
1. 先將細胞按傳代步驟消化、離心，至傳代步驟4，棄細胞上清，獲得細胞沉淀；
2. 加入適量預(yù)先配好的程序性凍存液輕輕重懸細胞，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標(biāo)記的凍存管中；
3. 將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；
4. 轉(zhuǎn)移細胞至液氮保存并登記細胞保存位置，液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長期保存，若低于80%建議重新凍存；
MFC細胞復(fù)蘇攻略
復(fù)蘇步驟
1. 將所需的完Q培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預(yù)熱30min后開始復(fù)蘇；
2. 準(zhǔn)備37℃溫水，將細胞從液氮罐取中出，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋，將細胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃，融化至米粒大小冰塊，終止水??；
3. 將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異；
4. 離心完成后，棄凍存液，用剛才預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，并輕柔重懸細胞后接種至T25或者10cm皿中。
常見問題及解決方案
細胞密度怎么計算的？
嚴(yán)格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù)。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn)，但也是相當(dāng)直觀、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式；
NO.2培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？
1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加完Q培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用完Q培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
NO.3細胞具體消化時間是多久？
每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完Q規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準(zhǔn)。
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