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細(xì)胞培養(yǎng)皿實(shí)驗(yàn)時(shí)“小黑點(diǎn)”現(xiàn)象的剖析
閱讀：2078 發(fā)布時(shí)間：2021-11-5
細(xì)胞培養(yǎng)皿適宜細(xì)胞和組織的中等規(guī)模培養(yǎng)，也可做稱量、分離和處理組織或細(xì)胞等多種實(shí)驗(yàn)中的暫放和儲存容器使用。在使用前要經(jīng)過清潔消毒，培養(yǎng)皿清潔與否對工作影響較大，可影響培養(yǎng)基的酸堿度，若有某些化學(xué)藥品的存在，會抑制細(xì)菌生長。
新購的細(xì)胞培養(yǎng)皿應(yīng)先用熱水沖洗，再置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，使游離堿性物質(zhì)除去，再用蒸餾水沖洗2次。
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常見到細(xì)胞及培養(yǎng)液中有一些大小不等、形態(tài)不同的未知“黑點(diǎn)”。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)由于細(xì)胞代謝、物質(zhì)交換、周邊環(huán)境變化，尤其是在從37℃培養(yǎng)箱中拿出來觀察的過程中，由于液體培養(yǎng)基的比熱較大，液內(nèi)溫度高于外界溫度，造成冷熱交換、小范圍內(nèi)形成液體流動加劇，當(dāng)然這些小碎末就會被攪動起來形成似乎“游動”的感覺；隨著細(xì)胞培養(yǎng)的繼續(xù)，部分細(xì)胞開始衰亡，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破裂，破裂后的細(xì)胞內(nèi)容物泄露到培養(yǎng)液中。尤其是溶酶體的破壞，連續(xù)性地造成其他細(xì)胞和細(xì)胞器的損傷，如果換液不很勤，就會出現(xiàn)進(jìn)一步破壞和殘?jiān)某霈F(xiàn)。“黑點(diǎn)”問題是很多細(xì)胞培養(yǎng)者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的問題，但到目前為止尚未找到其監(jiān)測和排除的試劑和手段，這首先是由于所謂“黑點(diǎn)”病原體根本難以收集和捕捉，這也從另一個(gè)側(cè)面證明了“黑點(diǎn)”問題的難以確定性；再說任何一種外來的微生物在培養(yǎng)基中都會有生命活動的反應(yīng)和表現(xiàn)，而不是簡單地運(yùn)動那樣的外觀性表現(xiàn)。
如果“黑點(diǎn)”的運(yùn)動狀況已經(jīng)到了用顯微鏡已經(jīng)可以觀察出的程度，其營養(yǎng)代謝和能量需求也就可想而知。這樣，培養(yǎng)液中的影響消耗、酸堿含量程度等都要發(fā)生明顯變化。
比如迅速的、大含量的沉淀，pH值的迅速下降，細(xì)胞大量破碎死亡、引發(fā)其它類型微生物侵染等等。而這些狀況，在所謂的“黑點(diǎn)”感染中，是很難觀察到的。同時(shí)“黑點(diǎn)”的出現(xiàn)而影響細(xì)胞狀態(tài)似乎得不到有力的證據(jù)。倒是細(xì)胞狀態(tài)下降的時(shí)候，“黑點(diǎn)”明顯增多了。很有可能是細(xì)胞狀態(tài)下降時(shí)，細(xì)胞衰亡產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。所以“黑點(diǎn)”屬于細(xì)胞碎片是比較可能和合理的。