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大鼠骨骼肌組織提取物?操作流程
閱讀：1003 發(fā)布時間：2022-10-13大鼠骨骼肌組織提取物操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線。
ME-180(人子宮頸表皮癌細胞)
MFC(小鼠胃癌細胞)
MG-63(人骨肉瘤細胞)
MGC80-3(人胃癌細胞)
MLTC-1(小鼠睪丸間質(zhì)細胞瘤細胞)
Molt-4(人急性淋巴母細胞白血病細胞)
MRC-5(人胚肺成纖維細胞 )
MS1(小鼠胰島內(nèi)皮細胞)
MSTO-211H(人肺癌細胞)
NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細胞)
NCI-H1299(人非小細胞肺癌細胞)
NCI-H1650(人非小細胞肺癌細胞)
NCI-H292(人肺癌細胞)
Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細胞)
NCI-N87(人胃癌細胞)
NG108-15(小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細胞)
NIH/3T3(小鼠胚胎細胞)
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)
NRK(大鼠腎細胞)
NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細胞)
OK(負鼠腎小管細胞)
OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細胞)
OS-RC-2(人腎癌細胞)
OVCAR-3(人卵巢癌細胞)
P19(小鼠畸胎瘤細胞)
P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞)
P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細胞)