以下是雞β干擾素(IFN-β)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明書核心內(nèi)容整理：

　　BS-4389 雞β干擾素(IFN-β)ELISA試劑盒

　　一、檢測原理

　　采用雙抗體夾心法，通過預(yù)包被的雞IFN-β抗體捕獲樣本中的目標(biāo)蛋白，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色系統(tǒng)反應(yīng)后，450nm波長下測定OD值，顏色深度與IFN-β濃度成正比。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被微孔板?：96孔或48孔規(guī)格(抗雞IFN-β抗體包被)

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：6濃度梯度(常見范圍：25-800pg/mL或15.625-1000pg/mL)

　　酶標(biāo)抗體?：HRP標(biāo)記的檢測抗體

　　顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B液

　　終止液?：2M硫酸溶液

　　濃縮洗滌液?：20×或30×需稀釋使用

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?：3000rpm離心10-30分鐘，避免溶血

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心去除顆粒物

　　組織勻漿?：按重量比加入PBS勻漿后離心取上清

　　保存條件?：-20℃分裝，避免反復(fù)凍融

　　四、操作步驟

　　平衡試劑?：所有組分室溫平衡20-30分鐘

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本按50-100μL/孔加入

　　孵育?：37℃反應(yīng)30-60分鐘，洗滌3-5次

　　顯色?：加入TMB避光反應(yīng)10-15分鐘

　　終止與檢測?：加終止液后立即測定450nm OD值

　　五、關(guān)鍵參數(shù)

　　檢測范圍?：2-48ng/L或15.625-1000pg/mL(不同品牌有差異)

　　靈敏度?：檢測限5.7pg/mL

　　精密度?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%

　　有效期?：6-12個月(2-8℃保存)

　　六、注意事項(xiàng)

　　不同批次試劑不可混用

　　顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制，強(qiáng)光會干擾結(jié)果

　　加樣需保持速度一致，避免孔間時(shí)間差過大

　　酶標(biāo)板開封后需密封防潮保存

　　完整操作請以試劑盒內(nèi)附說明書為準(zhǔn)，部分品牌提供免費(fèi)代測服務(wù)。

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