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　　單克隆分離是建立穩(wěn)定細胞系的重要環(huán)節(jié)，因而在現(xiàn)代生物技術和醫(yī)藥研發(fā)領域中應用廣泛，構建穩(wěn)定細胞系的常用方法有質粒轉染法和病毒侵染法，兩種方法都需要借助抗生素篩選，通過單細胞克隆分離獲得穩(wěn)定、遺傳特性一致的細胞群。

       通過單細胞克隆分離和抗生素篩選，獲得表達效率高、整合穩(wěn)定的細胞群，最終構建成穩(wěn)定細胞系；而病毒侵染法則是通過將攜帶目的片段的病毒，常用的如慢病毒，轉導入細胞，再通過單細胞克隆和抗生素篩選，獲得穩(wěn)定細胞系。

　　目前常規(guī)的單克隆分離技術主要包括有限稀釋法、克隆環(huán)法和顯微操作法。有限稀釋法是通過將細胞懸液連續(xù)梯度稀釋，使細胞培養(yǎng)板的一個孔中僅有1個細胞，再經(jīng)過兩周左右時間增殖，形成細胞群，再經(jīng)過驗證獲得穩(wěn)定克?。豢寺…h(huán)法是通過在10-15cm的細胞培養(yǎng)皿中，將細胞接種低密度，使分散的單個細胞各自增殖成細胞群，用克隆環(huán)方式與周圍的細胞隔離開，通過胰酶消化，轉到新的孔板中繼續(xù)培養(yǎng)擴增，并檢測驗證而獲得穩(wěn)定克?。伙@微操作法是借助顯微鏡，在放大的視野下挑取單細胞，再轉至培養(yǎng)孔中，逐漸擴增獲得單克隆。

　　哺乳動物細胞通過分離、稀釋接種，培養(yǎng)在適宜于單細胞生長的培養(yǎng)液中，形成細胞克隆，運用這項技術可以制作細胞成活曲線，即在接種相同數(shù)量細胞的培養(yǎng)瓶中，加入不同濃度的化學藥品，或照以不同劑量的射線，觀察其對細胞的聽見害程度，由此可以在哺乳類細胞中進行誘變試驗及分離突變細胞。

　　方法：

　　a、在培養(yǎng)皿中制備飼養(yǎng)細胞(小鼠腹腔細胞)單層。

　　b、臨用前將2.0%瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的HT培養(yǎng)液混勻，配成1%瓊脂糖培養(yǎng)液，45℃水浴中溫育。

　　c、吸去平皿上層培養(yǎng)液，加入1%瓊脂糖培養(yǎng)液3ml，室溫10分鐘。

　　d、取雜交瘤細胞懸液1ml，加入1%瓊脂糖培養(yǎng)液1ml混勻，鋪于上層。

　　e、37℃、7.5%濕潤培養(yǎng)7-14天，克隆生長至2mm時，用毛細吸管吸出克隆，直接轉種于含有飼養(yǎng)細胞的24孔板，擴大培養(yǎng)。

　　f、吸取上清，檢測抗體，陽性孔可繼續(xù)克隆化，或擴大培養(yǎng)、凍存。