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淺析單細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題
閱讀：936 發(fā)布時(shí)間：2021-8-26
單細(xì)胞鋪板是克隆篩選的常用方式，其中手動的有限稀釋法更是具備可操作性強(qiáng)，成本相對低廉等優(yōu)勢，因此受到廣大用戶的青睞，長期用于克隆篩選的過程中。
手動細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題：
1、細(xì)胞計(jì)數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差？
考慮細(xì)胞沉降導(dǎo)致懸液不勻；懸液體積過大或過?。幌♂尡稊?shù)太高或太低等原因造成。
2、如何克服細(xì)胞懸液不均勻的問題？
盡量將細(xì)胞吹打?yàn)閱蝹€(gè)，防止抱團(tuán)，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。
3、一般加多少細(xì)胞懸液合適？
由于加入計(jì)數(shù)室的量，過少會導(dǎo)致計(jì)數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡，過多則會使得計(jì)數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計(jì)數(shù)板，使得高度變高，體積變大；計(jì)數(shù)室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。
4、計(jì)數(shù)時(shí)，細(xì)胞稀釋倍數(shù)如何控制？
若是計(jì)數(shù)室細(xì)胞過稀或過密，會造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細(xì)胞/ml。如一般10cm皿的細(xì)胞約300-500萬個(gè)，一些細(xì)胞個(gè)體小也能達(dá)到1000-2000萬，可根據(jù)所需細(xì)胞數(shù)目取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計(jì)數(shù)。舉例來說可將100ul細(xì)胞懸液加入到900ul培養(yǎng)基中，混勻后進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)所得乘以10即為實(shí)際細(xì)胞密度。
5、計(jì)數(shù)的原則有哪些？
計(jì)數(shù)時(shí)對壓在外圈邊線的細(xì)胞遵循“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右"的統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，遇到兩個(gè)以上的細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)計(jì)為一個(gè)細(xì)胞。
因此手動有限稀釋鋪板還是會存在效率低下的問題。
Namocell單細(xì)胞分離儀為單細(xì)胞鋪板提供了更好的解決方案。一次性芯片，保證樣本之間*隔離；儀器體積小巧，可置于超凈臺中 高效分選：96孔板分選不到1min，384孔板4min以內(nèi)，單克隆率超過95%輕松分選：儀器操作簡單，無需操作維護(hù)。
Namocell單細(xì)胞鋪板的原理如下：將細(xì)胞通過一次性的芯片上端加樣孔，注入到芯片腔體中。單細(xì)胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域，機(jī)器能對細(xì)胞進(jìn)行識別，去除掉細(xì)胞碎片，死細(xì)胞以及狀態(tài)較差的細(xì)胞，使得終落到孔板中的細(xì)胞都具有很好的活性，能夠捕獲每一個(gè)活性細(xì)胞，形成1ul體積的液滴，輕柔地落進(jìn)孔板中。整個(gè)過程對細(xì)胞的損傷可以忽略不計(jì)，所以分選得到的細(xì)胞絕大多數(shù)的細(xì)胞都能再次分裂生長。