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2020-7-1 閱讀(1135)
DAPI溶液，也稱DAPI dihydrochloride，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。
盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和460nm。
DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。
1、用1mL ddH2O將DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。
DAPI不能直接用PBS等緩沖溶液溶解，需要先用水將其溶解。
2、取適量DAPI水溶液加到PBS中，制備成10~50µM的DAPI溶液。 推薦以下PBS的配制方法： 將8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L純水中。
3、將1/10培養(yǎng)基體積的DAPI溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。也可以1/10濃度的DAPI緩沖液代替培養(yǎng)基。
4、在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10~20分鐘。
5、用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
6、用帶有360nm激發(fā)波長(zhǎng)，460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
