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彈性蛋白酶檢測方法

2019-8-14 閱讀(325)

彈性蛋白酶,由動物的胰臟用水提取而,也可用細菌的培養(yǎng)液在低溫下用水提取獲得。

彈性酶是由240個氨基酸組成的多肽,其CAS:39445-21-1,分子從鏈走向和空間構造型與凝乳蛋白酶相似。彈性酶是有絲氨酸的蛋白酶,它存在于所有動物的胰臟中。在人的動脈、皮膚、血小板和白血球中也存在彈性酶活力的物質(zhì)。除此之外,一些微生物和植物中也具有彈性酶活力物質(zhì)。

彈性蛋白是一種單純蛋白、它不含輔助基和金屬離子,其活性中心取決于特異的三維結構,當其中發(fā)生兵役,構型將會改變、引起失活。

彈性蛋白酶制備提取:

一般由動物的胰臟用水提取而得,也可用細菌的培養(yǎng)液在低溫下用水提取而得。

彈性蛋白酶檢測步驟:(僅供參考
 (1)準備適當數(shù)量的包被微孔。標準品、稀釋標本加樣量均為100μl/孔。五個標準品濃度依次為3000、1500、750、375 和0ng/ml(以標本稀釋液作為0 標準)。

  1. 用封片膜封板。以孵育振蕩器(350 ~400rpm)室溫(18 ~28℃)反應60min。   

(3)棄去封板膜。洗板: 以洗滌液注滿微孔,每次浸泡1min,共洗板5 次。  

?。?)每孔加酶結合物100μl。用封板膜封板。以孵育振蕩器( 350 ~400rpm) 室溫(18 ~28℃)反應45min。  

?。?)棄去封板膜。洗板:以洗滌液注滿微孔,每次浸泡1min, 共洗板5 次。

 (6)每孔加顯色液100μl, 室溫避光反應20min[顯色液臨用前配制。方法是:顯色劑A: 顯色劑B按體積比40: 1混合( 如顯色劑A 400μl + 顯色劑B 10μl),顯色液配制后30min 內(nèi)使用。  

?。?) 每孔加終止液100μl,充分混勻。15min 內(nèi)上酶標儀雙波長450/630nm 比色。



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