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上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
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2018-11-29 閱讀(1425)
異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應(yīng)用。
誘導(dǎo)原理：
E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結(jié)合位點。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達 。
在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時，I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié) 合，抑制轉(zhuǎn)錄起動。當有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。
使用方法：
把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并進行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當DNA片段插入pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化lacZ缺失細胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長出菌體的藍白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。
作用：
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)?；谶@個特性，當pUC系列的載體DNA（或其他帶有l(wèi)acZ 基因載體DNA）以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉(zhuǎn)化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉(zhuǎn)染時，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體。此外，它還可以作為具有l(wèi)ac或tac等啟動子的表達載體的表達誘導(dǎo)物使用。
上海吉生化科技有限公司備有現(xiàn)貨產(chǎn)品異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)，貨號為I37070，可用于誘導(dǎo)外源基因的表達，普遍應(yīng)用于原核表達系統(tǒng)，使其表達量增高，產(chǎn)物穩(wěn)定，具有易鑒定，易純化的優(yōu)點。保存溫度: 2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室溫可放置一個月。
