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技術(shù)文章

豬巨細(xì)胞病毒LAMP試劑盒檢測(cè)特異性與靈敏度

閱讀:287          發(fā)布時(shí)間:2021-1-12

豬巨細(xì)胞病毒LAMP試劑盒檢測(cè)特異性與靈敏度:

高性能的UNICONTM Taq熱啟動(dòng)酶及組分優(yōu)化的反應(yīng)體系保證高度的特異性擴(kuò)增,提升了擴(kuò)增效率,使得UNICONTM qPCR Master Mix具有*的檢測(cè)靈敏度。以人293T細(xì)胞cDNA為模板,在相同條件下擴(kuò)增低拷貝hbcl6基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix具有更好的擴(kuò)增特異性、更高的擴(kuò)增效率及更好的復(fù)孔重復(fù)性,檢測(cè)靈敏度更高。

質(zhì)量檢測(cè)
1)紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下:
RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測(cè)得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來(lái)測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測(cè)
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

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