化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
原代細(xì)胞染色體標(biāo)本制作
閱讀：249 發(fā)布時(shí)間：2018-6-5一、原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?nbsp;
通過(guò)這一實(shí)驗(yàn)，要求學(xué)生了解哺乳動(dòng)物染色體標(biāo)本的制作方法，并對(duì)動(dòng)物染色體進(jìn)行觀察。
二、實(shí)驗(yàn)原理
由于小鼠四肢骨內(nèi)骨髓細(xì)胞中的造血干細(xì)胞是生成各種血細(xì)胞和原始細(xì)胞，具有高度的分裂能力，本實(shí)驗(yàn)采用這一材料，通過(guò)前處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體標(biāo)本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進(jìn)行染色體組型分析。
三、實(shí)驗(yàn)用品
1．材料：小白鼠
2．器具：注射器（1ml,5ml）、5號(hào)針頭、解剖盤(pán)、解剖剪、鑷子、玻璃吸管、10ml刻度的離心管、離心機(jī)、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、濾紙、擦鏡紙、棉花、量筒、天平、恒溫水浴鍋
3．藥品：0.01%秋水仙素、0.075MKCl、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液、0.01M磷酸緩沖液(PH6.8)，0.85%生理鹽水。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1．預(yù)處理：實(shí)驗(yàn)前2.5-3小時(shí)，按每克體重注射0.02ml，給小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．?dāng)囝i處死動(dòng)物，解剖小鼠內(nèi)生殖器官，鑒別雌雄性別。
3．剝?nèi)」晒?，剔去肌肉組織，剪去兩端的股骨頭
4．沖洗骨髓：吸取0.6ml生理鹽水,注射器針頭插入股骨一端,反復(fù)沖洗骨髓到8ml的離心管中.
5．低滲：加入4.4ml0.075MKCl溶液,37oC水浴低滲40分鐘，中間（約20分鐘）用吸管吹打一次，使細(xì)胞分散，懸浮于溶液中。
6．離心：1000rpm離心10分鐘后棄去上清液，離心之前加1ml固定液并用吸管輕輕吹勻，進(jìn)行預(yù)固定。
7．固定I：沿管壁慢慢加入固定液5ml，用吸管吹打成細(xì)胞懸液后，室溫下靜置30分鐘，15分鐘時(shí)吹打一次。
8．離心：1000rpm離心10分鐘，棄上清液。
9．固定II：同固定I。
10．離心：同8離心后加0.3-0.5ml固定液，吸管吹打成細(xì)胞懸液。
11．滴片：用吸管吸取細(xì)胞懸液，滴在預(yù)冷的載玻片上，在酒精燈火焰上微微加熱，室溫晾干
12．染色：10% Giemsa染液染色30分鐘；
鏡檢：低倍———高倍 。
五、注意事項(xiàng)
低滲與離心等步驟的操作要輕。
觀察細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為：
1．細(xì)胞完整，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上。
2．染色體形態(tài)和分布良好。
3．無(wú)重疊，即使有個(gè)別重疊，也要能明確辯認(rèn)，以免差錯(cuò)。
4．所觀察的細(xì)胞處于同一有絲分裂階段，即染色體螺旋化程度或染色體長(zhǎng)短大致一樣。
在所觀察的原代細(xì)胞周?chē)瑳](méi)有離散的單個(gè)或多個(gè)染色體存在，以免影響計(jì)數(shù)。
5 x 10^5 cells/vial 人支氣管上皮細(xì)胞 HBEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人氣管上皮細(xì)胞 HTEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人小氣道上皮細(xì)胞 HSAEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人肺成纖維細(xì)胞 HPF
1 x 10^6 cells/vial 人肺成纖維細(xì)胞 HPF
5 x 10^5 cells/vial 人支氣管平滑肌細(xì)胞 HBSMC
5 x 10^5 cells/vial 人氣管平滑肌細(xì)胞 HTSMC
5 x 10^5 cells/vial 人支氣管成纖維細(xì)胞 HBF
5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌細(xì)胞 HSkMC
5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞 HSkMSC
5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌成肌細(xì)胞 HSkMM
原代細(xì)胞