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干細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)技術(shù)：形態(tài)學(xué)檢查法
閱讀：1449 發(fā)布時(shí)間：2018-5-29當(dāng)機(jī)體受到抗原的刺激時(shí)，干細(xì)胞就可以轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)化在一定的程度上代表著機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。這種轉(zhuǎn)化也可在體外的T細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中加入適當(dāng)?shù)拇碳ぴ霈F(xiàn)，并表現(xiàn)出形態(tài)上的變化。目前常采用PHA誘發(fā)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)作為檢查機(jī)體細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)。具體方法有形態(tài)學(xué)檢查法。
（一）操作方法
1． 于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加0.2ml馬血，對(duì)照組與試驗(yàn)組各做2瓶，試驗(yàn)組均加PHA 30?g；
2．37℃培養(yǎng)72h，每天輕搖1~2次；
3．取出培養(yǎng)瓶，搖散血，倒入離心管，3 000r/min離心10min，去上清液；
4．用血球泥制備推片，晾干；
5．以瑞氏染液染2min~3min，加等量緩沖液，混勻繼續(xù)染3min，蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min，餾水沖洗，晾干；
6．鏡檢，觀察，計(jì)數(shù)。
（二）注意事項(xiàng)
1．培養(yǎng)液zui適pH為7.2~7.4，過(guò)酸過(guò)堿都會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)而降低轉(zhuǎn)化率。培養(yǎng)液的類型與動(dòng)物的白細(xì)胞有關(guān)，如小鼠的淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)，用RPMI-1640，用199液則不成功。
2．培養(yǎng)時(shí)間 以72h~120h轉(zhuǎn)化率zui高，超過(guò)這個(gè)時(shí)間，則轉(zhuǎn)化率反而下降。
3．吞噬細(xì)胞有時(shí)在形態(tài)上易與“過(guò)渡型"混淆。但巨噬細(xì)胞有其固有的特點(diǎn)，核占細(xì)胞比較小且偏一邊，核染色質(zhì)濃集，細(xì)胞漿呈藍(lán)灰色或紅褐色，胞漿內(nèi)有大小不等的顆?；蛲淌晌?，且含有大小不等的氣泡。
4．涂片要少蘸些細(xì)胞，推出尾部來(lái)，因淋巴細(xì)胞較大，易集中在尾部及邊緣。
5．觀察淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，染色不要太濃，以便觀察核仁。
6．嚴(yán)格的無(wú)菌操作，是干細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)成功的關(guān)鍵。
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