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培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備
閱讀：306 發(fā)布時(shí)間：2018-12-18| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 662.8KB |
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培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備
實(shí)驗(yàn)材料 胰蛋白酶細(xì)胞
試劑、試劑盒 EDTA·2NaPBS
儀器、耗材 離心管
實(shí)驗(yàn)步驟
一、培養(yǎng)細(xì)胞的特征
一般細(xì)胞培養(yǎng)分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)，由于細(xì)胞的增殖有可能形成大小不等的細(xì)胞團(tuán)塊或連接成片。如果兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞粘連在一塊或細(xì)胞碎片過(guò)多都將影響 FCM 結(jié)果，進(jìn)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。所以，制備合格的培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液十分重要。
二、培養(yǎng)細(xì)胞樣品的制備程序
1. 將培養(yǎng)細(xì)胞用 0.04% 乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA·2Na）或 0.29% 胰蛋白酶消化 3~7 min（根據(jù)室溫情況而定），至光鏡下見(jiàn)到貼壁細(xì)胞間出現(xiàn)篩狀間隙為止，棄去消化液，加 PBS 液。
2. 用吸管將細(xì)胞從瓶壁上輕輕吹打下來(lái)，并移入離心管中。
3. 短時(shí)低速離心，即 800~1000 r/min，5 min。
4. 棄上清，加 pH 7.4 的 PBS 液 5~8 ml，低速短時(shí)離心，800~1000 r/min 離心 3~5 min；重復(fù) 2~3 次，以去除細(xì)胞懸液中的細(xì)胞碎片。
5. 加少許 PBS 液，將沉淀細(xì)胞輕輕吹打均勻。加固定液或低溫保存待用。