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組織活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒（DHE）

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

組織活性氧檢測(cè)試劑盒是一種利用熒光探針DHE進(jìn)行組織活性氧檢測(cè)的試劑盒。本試劑盒中的DHE ROS探針為紅色熒光的活性氧探針，具有510/610nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。DHE ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成紅色熒光物質(zhì)，紅色熒光強(qiáng)度與組織內(nèi)活性氧水平成正比，檢測(cè) DHE 產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。 在激發(fā)波長(zhǎng)510nm，發(fā)射波長(zhǎng)610nm附近，使用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、等檢測(cè)DHE產(chǎn)物熒光，從而測(cè)定組織內(nèi)活性氧水平?；钚匝?Reactive oxygen species, ROS)包括過(guò)氧化氫（H2O2，Hydrogen peroxide）、羥基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、單線(xiàn)態(tài)氧（1O2，Singlet oxygen）、 一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧陰離子(•O2-，Superoxide anion)、過(guò)氧化自由基(ROO•，Peroxylradical)、過(guò)氧羥自由基（HOO•，hydroperoxyl）及其下游產(chǎn)物過(guò)氧化物過(guò)氧亞硝基陰離子
（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羥化物等，參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過(guò)程。
 活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生主要是氧化磷酸化的結(jié)果，在呼吸鏈中，在某些位點(diǎn)會(huì)有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應(yīng)，在酶或非酶作用下引發(fā) 一系列反應(yīng)生成不同種類(lèi)的活性氧：“泄露”的電子最初和氧氣反應(yīng)生成超氧陰離子自由基（O2•-）。超氧陰離子遇水生成 H2O2，同時(shí)過(guò)氧化氫也可由氧氣在單 胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）的作用下生成，生成的過(guò)氧化氫在髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）的催化下與 Cl-反應(yīng)可生成ClO-，在鐵或銅離子的催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)生成OH•，超氧陰離子遇氮氧化物反應(yīng)生成ONOO-。這些生成的高氧化活性的物質(zhì)統(tǒng)稱(chēng)為活性氧。
 適用：新鮮組織， 一般最好使用新鮮組織樣本檢測(cè)活性氧，反映的是組織當(dāng)時(shí)的活性氧狀態(tài)。凍存的組織樣本的ROS在長(zhǎng)期凍存過(guò)程中會(huì)損失掉，有條件的話(huà)就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的組織樣本。已經(jīng)凍存的組織樣本中殘余的ROS也可以用本試劑盒檢測(cè)。

二、產(chǎn)品組成：

三、自備材料：

1、熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀，離心機(jī)，移液器，冰箱，冰盒

2、PBS 緩沖液或者 HBSS

3、離心管，吸頭，一次性手套，熒光檢測(cè)專(zhuān)用黑色 96孔板

 組織活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒（DHE）

四、操作步驟(僅供參考)：

1、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2、熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。

3、探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描，以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。

4、盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

5、原位檢測(cè)必須使用熒光檢測(cè)專(zhuān)用的黑色透明底96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

6、操作步驟僅供參考，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際樣本情況調(diào)整。

 

五、注意事項(xiàng)：

1、正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7、避免反復(fù)凍融。

8、可以根據(jù)需要分裝后凍存。

9、探針為DMSO溶液，在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

  

六、有效期：-20 ℃避光有效期為一年

 

組織活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒（DHE）