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MinuteTM無表面活性劑的厚壁微生物總蛋白
閱讀：253 發(fā)布時(shí)間：2021-9-221
MinuteTM無表面活性劑的厚壁微生物總蛋白
提取試劑盒
目錄號(hào) YD-016
描述：
從厚壁微生物中提取蛋白質(zhì)是實(shí)驗(yàn)室常見的實(shí)驗(yàn)操作，傳統(tǒng)的操作方法非常復(fù)雜，冗長，不可
控。本試劑盒提供了一種無表面活性劑，快速，可靠的從厚胞壁微生物提取總蛋白的方法。可
以從酵母，絲狀真菌，革蘭氏陽性和陰性菌，蟲卵，微藻中等提取總蛋白。試劑盒提供了優(yōu)化
的無表面活性劑和 EDTA 的緩沖液。試劑盒所有步驟在單一管內(nèi)完成，時(shí)間＜10 分鐘，得率可
達(dá) 2-4 mg/ml.可用于對(duì)數(shù)生長期和靜止生長期微生物。提供的原材料做夠做 50 次提取。
應(yīng)用：
提取的蛋白可應(yīng)用于 SDS-PAGE、WB，IP，ELISA，酶活性檢測和蛋白質(zhì)組學(xué)分析。緩沖液可以兼容 IMAC
樹脂用于 His-標(biāo)簽蛋白純化。
試劑盒組分
1. 20ml 緩沖液 A
2. 20ml 緩沖液 B
3. 5g 蛋白提取粉
4. 4 根 1.5ml 離心管塑料研磨棒
5. 50 個(gè) 1.5ml 離心管
儲(chǔ)存：
室溫儲(chǔ)存
所需附加材料
臺(tái)式離心機(jī)（最大轉(zhuǎn)速 14000-16000rpm）
產(chǎn)品重要信息
蛋白酶抑制劑不是必須加入，但是如果下游實(shí)驗(yàn)需要較長時(shí)間或者蛋白提取后需要保存較長時(shí)
間，建議在緩沖液中添加蛋白酶抑制劑。推薦使用 BCA（Pierce）試劑盒用于蛋白濃度測定。
研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前加入緩沖液。
操作方法：
1. 在 1.5ml 離心管中離心收集微生物樣品。確保樣品體積在 20-30ul 左右。可以在另一個(gè) 1.5ml
離心管中加入 30ul 水比較體積估算。
2. 加入 1ml 水，最高速度離心 2 分鐘清洗樣品，棄去上清液。加入 50ul Buffer A 重懸沉淀。
秤取 80-90mg 蛋白提取粉加入管中（提取粉盡量不要接觸管壁，可折疊稱量紙倒入）。
3. 用配有的研磨棒反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨 2 分鐘。再次加入 50ul 緩沖液 A 和 100ul 緩沖液 B 到同一管
中，繼續(xù)研磨約 30 秒 (注意：研磨棒可以重復(fù)使用，在清洗劑中簡單浸泡后，用水沖洗并用紙
巾擦干）。蓋上蓋子渦旋震蕩 10 秒鐘。
4. 最高速離心 3-4 分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中（此部分為無表面活性劑的總蛋白）。如果希
望增加蛋白產(chǎn)量，可以重復(fù)步驟 3-4 一次。通常蛋白產(chǎn)量為 2-3mg/ml。提取的蛋白可以儲(chǔ)存于
-80℃供將來使用。
應(yīng)用提示：最終的蛋白質(zhì)產(chǎn)量與步驟 3 中研磨的頻率和時(shí)間成正比。研磨時(shí)請(qǐng)使用試劑盒中提
供的研磨棒和離心管，以保證最佳效果。