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技術(shù)文章

MinuteTM新鮮/ 冷凍組織單細(xì)胞懸液分離試劑盒

閱讀:462          發(fā)布時(shí)間:2021-9-22
MinuteTM新鮮/ 冷凍組織單細(xì)胞懸液分離試劑盒
目錄號(hào) CS-031
描述:
從新鮮和/或冷凍組織中獲得優(yōu)質(zhì)細(xì)胞懸浮液是后續(xù)實(shí)驗(yàn)的重要步驟,如流式細(xì)胞術(shù)分析
(FACS)和核酸純化。細(xì)胞懸浮液可以通過以下一種或三種方法從組織中分離出來:化學(xué)組織分
離、酶消化和物理分離。許多方法都過于繁瑣和費(fèi)時(shí)。最重要的是,組織中尤其是冷凍組織中
的細(xì)胞,通常被破壞,表現(xiàn)出低完整性和低活性。很難從結(jié)締組織含量較高的冷凍樣品中獲取
得高活性的細(xì)胞懸液,例如肝、腎、腦組織等。我們開發(fā)的這款試劑盒,簡單、快速、高效、
無需特殊儀器,利用化學(xué)和物理分離機(jī)制將細(xì)胞從新鮮或冷凍的組織中分離出來。該試劑盒可
在20分鐘內(nèi)完成,可獲得具有較高完整性和活性的細(xì)胞懸液。
應(yīng)用:
用該試劑盒獲得的細(xì)胞懸液可以用于 FACS 分析和其他應(yīng)用。
試劑盒組分
1. 組織分離液 15ml
2. 1.5ml 離心管 50 個(gè)
3. 1.5ml 離心管的研磨杵 2 個(gè)
儲(chǔ)存:常溫運(yùn)輸,4 度儲(chǔ)存
所需附加材料
臺(tái)式離心機(jī)
1X PBS 或 1X FACS 緩沖液(1XPBS 加入 5%FBS 或 BSA)
40-100um 的細(xì)胞篩
操作方法:(將組織分離液和 FACS 緩沖液冰上預(yù)冷)
1. 取10-30毫克的組織置于提供的1.5 ml離心管中。加入200μl預(yù)冷的組織分離液覆蓋組織,
冰上孵育5-10分鐘。使用提供的研磨杵反復(fù)扭轉(zhuǎn)研磨組織100 200次(這個(gè)過程大約2-3
分鐘)。研磨杵可重復(fù)使用,用清水清潔后,用紙巾擦干即可。不建議使用自備的1.5ml離
心管,因?yàn)槠渌?.5ml離心管和試劑盒提供的研磨杵可能不匹配。
2. 研磨后,500 X g,離心3分鐘,棄去上清液。用研磨杵將沉淀扭轉(zhuǎn)研磨100-150次。將研磨
杵放在管中,加入1ml的FACS緩沖液,將樣品再研磨幾次重懸。如前所述,清潔并擦干研
磨杵,以供將來使用。
3. 用一個(gè)1ml的吸頭上下吹打10 20次重懸細(xì)胞。將細(xì)胞懸液過40 - 100μm細(xì)胞篩(細(xì)胞篩
的孔徑根據(jù)最終所需細(xì)胞大小選擇)。用低速離心(500xg, 3min)收集細(xì)胞,再用適當(dāng)量的
FACS緩沖液中重懸細(xì)胞。 不要使用PBS重懸細(xì)胞,因?yàn)榧?xì)胞非常脆弱。如果細(xì)胞不在
FACS緩沖液或其他含血清的緩沖液(例如:含有10- 20%胎牛血清的組織培養(yǎng)基)中重
懸,細(xì)胞的活力將受到顯著影響。

 


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