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人加德納菌抗體IgG（GV IgG）酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 96T 使用目的： 本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中加德納菌抗體 IgG（GV IgG）表達(dá)。 實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人加德納菌抗體 IgG（GV IgG）表達(dá)。用純化的抗原 包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中加德納菌抗體 IgG（GV IgG）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除 去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物， 經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較， 從而判定標(biāo)本中人加德納菌抗體 IgG（GV IgG）的存在與否。 試劑盒組成 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶 3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 個 標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1 孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動混勻， 3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同 3。 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 計算和結(jié)果判定： 試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為人加德納菌抗體 IgG（GV IgG）陰 性 陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人加德納菌抗體 IgG（GV IgG）陽 性。注意事項 1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。 2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5．底物請避光保存。 6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm 7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須 注意安全。 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 個月