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技術(shù)文章

人真皮成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式

閱讀:286          發(fā)布時間:2021-6-17

真皮成纖維細(xì)胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織,真皮成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。

       一般而言,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時,真皮成纖維細(xì)胞由可增殖,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,可重塑基質(zhì)的表型,同時,它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時的炎癥反應(yīng)。

       以下是提供的一種人真皮成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考):
       1.首先在分離真皮成纖維細(xì)胞時要做到在無菌條件下進(jìn)行,打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理。
       2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,消毒2min,
       3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,
       4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,
       5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱過夜消化,
       6.第二天,用鑷子將表皮與真皮分開(薄的那層是表皮,厚的那層是真皮),
       7.將真皮剪碎,移至離心管,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),
       8.用100 μm網(wǎng)篩過濾,
       9.取濾液,300 g,離心5 min,
       10.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,
       11.鋪瓶,
       12.隔天換液。
       以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,使用的試劑比例也不盡相同,皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測,采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)。細(xì)胞純度可高達(dá)于90%,所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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