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Western Blotting 問(wèn)題解答
閱讀：299 發(fā)布時(shí)間：2021-3-101、膠片上存在反轉(zhuǎn)印象（如：亮的條帶、黑的背景）？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
2、膜上有黃色或棕色的沉積？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
3、在暗室中條帶過(guò)于明亮？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
4、條帶的發(fā)光時(shí)間持續(xù)了至少8小時(shí)？
原因：HRP的濃度過(guò)高；
解決：稀釋HRP至少10倍。
5、信號(hào)太弱或沒(méi)有？
原因：
1.太多的HRP積聚導(dǎo)致信號(hào)快速的消退；
2.抗原或抗體的濃度不夠；
3.轉(zhuǎn)印不成功；
4.HRP或其他底物的效價(jià)降低。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.增加其濃度；
3.尋找合適的轉(zhuǎn)移方法和條件；
4.選擇其他的合適底物。
6、背景高？
原因：
1.HRP濃度過(guò)高；
2.封閉無(wú)效；
3.不適合的封閉試劑；
4.洗滌不充分和洗滌液的量；
5.膠片曝光過(guò)度；
6.抗原或抗體的濃度太高。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.尋找合適的封閉方法；
3.選用其他的封閉試劑；
4.增加洗滌的時(shí)間,次數(shù)；
5.減少曝光時(shí)間；
6.稀釋抗原或抗體。
7、蛋白質(zhì)條帶上有空泡影像？
原因：
1.蛋白質(zhì)沒(méi)有被充分轉(zhuǎn)?。?/p>
2.膜沒(méi)有預(yù)先浸濕；
3.在膠片和膜之間有氣泡。
解決：
1.尋找合適的轉(zhuǎn)移方法和條件；
2.在轉(zhuǎn)印前充分浸濕；
3.在暴光之前趕走氣泡。
8、膠片上背景彌散？
原因：HRP標(biāo)記的抗體出現(xiàn)了積聚；
解決：稀釋HRP至少10倍。
9、無(wú)特異性條帶？
原因：
1.HRP濃度過(guò)高；
2.SDS促使非特異蛋白質(zhì)條帶黏附在目的蛋白質(zhì)條帶上。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.在操作過(guò)程中不要加SDS。