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無菌檢查方法適用性試驗(yàn)
閱讀：966 發(fā)布時(shí)間：2021-1-20方法適用性試驗(yàn)。為保證無菌檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)供試品在該實(shí)驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)，所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝，原、輔料組分或檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。
方法適用性試驗(yàn)時(shí)，按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作試驗(yàn)。供試品對每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行方法確認(rèn)。FTM培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)；TSB培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。在進(jìn)行陽性試驗(yàn)時(shí)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌應(yīng)加入到FTM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，而枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉應(yīng)加入到TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
薄膜過濾法的適用性試驗(yàn)。將規(guī)定量的供試品按薄膜過濾法過濾，沖洗，在后一次的沖洗液中加人小于100cfu的試驗(yàn)菌，過濾，濾凈后每個培養(yǎng)器內(nèi)灌注100ml培養(yǎng)基；因方法適用性試驗(yàn)旨在確認(rèn)供試品在該實(shí)驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)，可向終培養(yǎng)體系中直接加人小于100cfu的試驗(yàn)菌。方法適用性試驗(yàn)應(yīng)在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，不得在潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)操作菌液，操作全程需要注意保持環(huán)境的無菌性。取裝有同體積培養(yǎng)基的容器加人等量的試驗(yàn)菌，作為陽性對照。含培養(yǎng)基的各試驗(yàn)容器按規(guī)定溫度培養(yǎng)不得超過5天。各試驗(yàn)菌同法逐一進(jìn)行驗(yàn)證，以大腸埃希菌代替培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)中的銅綠假單胞菌，其余同培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。藥品生產(chǎn)單位也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的常見污染菌作為試驗(yàn)用菌，其意義是更能確定所選方法適合該產(chǎn)品中污染菌的檢出。
供試液和沖洗液經(jīng)過薄膜過濾時(shí)流速不宜過快；每張濾膜每次沖洗量為100ml，總沖洗量一般不超過500ml，高不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。方法適用性實(shí)驗(yàn)的目的之一就是要尋找沖洗量相對較小的方法。為發(fā)揮濾膜的大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。常規(guī)選用濾膜直徑約為50mm，若使用其他尺寸的濾膜，應(yīng)對稀釋液和沖洗液體積進(jìn)行調(diào)整，并重新驗(yàn)證。
直接接種方法適用性試驗(yàn)。取適宜裝量的FTM培養(yǎng)基6管，分別加入金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌的菌液各2管；取適宜裝量的TSB培養(yǎng)基6管，分別加入枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌液各2管。每管加菌量小于100cfu。其中1管接人規(guī)定量的供試品，另1管作為陽性對照，各試驗(yàn)管按規(guī)定的溫度培養(yǎng)不得超過5天。
方法適用性試驗(yàn)的結(jié)果判斷。與陽性對照比較,如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長良好，并且與陽性對照容器內(nèi)的對照菌培養(yǎng)結(jié)果相似，則供試品在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或抑菌作用消除，可按該法進(jìn)行供試品的無菌檢查法檢查。如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，則供試品在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。
具有抗菌活性的供試品，若采用薄膜過濾法，可根據(jù)供試品的抗菌活性強(qiáng)弱，采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法消除抑菌作用。若采用的是直接接種法，可根據(jù)實(shí)際情況增加培養(yǎng)基的用量、在稀釋液或培養(yǎng)基中使用中和劑、滅活劑或表面活性劑等方法消除抑菌性。并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。若需使用中和劑、滅活劑或表面活性劑等，應(yīng)證明其有效性，且對微生物無毒性。已進(jìn)行過無菌檢查方法適用性試驗(yàn)的供試品，按此法進(jìn)行無菌檢查。無菌檢查時(shí)采用的方法應(yīng)與方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法相同。
本文節(jié)選自《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》（2019版）無菌檢查法章節(jié)。