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血清總鐵結合能力測試盒
閱讀：296 發(fā)布時間：2020-11-10測定意義：
血清總鐵結合能力指血清轉鐵蛋白可結合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等 疾病的發(fā)生密切相關。
測定原理：
Fe2+與菲洛嗪反應形成紫紅色化合物，在 562nm 處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉鐵蛋 白可以與 Fe3+結合，剩余未結合的 Fe3+可以被還原成 Fe2+，此時吸光度 A1 與未結合 Fe3+數(shù) 量正相關；酸化后，轉鐵蛋白結合的 Fe3+釋放，并且進一步被還原成 Fe2+ ，此時吸光度 A2 與總 Fe3+數(shù)量正相關。A2 減 A1 與 TIBC 濃度呈正比。
血清總鐵結合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
血清總鐵結合能力指血清轉鐵蛋白可結合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等
疾病的發(fā)生密切相關。
測定原理：
Fe2+與菲洛嗪反應形成紫紅色化合物，在 562nm 處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉鐵蛋
白可以與 Fe3+結合，剩余未結合的 Fe3+可以被還原成 Fe2+，此時吸光度 A1 與未結合 Fe3+數(shù)
量正相關；酸化后，轉鐵蛋白結合的 Fe3+釋放，并且進一步被還原成 Fe2+ ，此時吸光度 A2
與總 Fe3+數(shù)量正相關。A2 減 A1 與 TIBC 濃度呈正比。
自備實驗用品及儀器：
天平、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。（臨用前根據用量將 A 液和 B 液按 1:1 混合）
試劑四：液體 7mL×1 瓶，4℃保存。
測定操作表：
1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長至 562nm。
2、操作表
對照管 測定管
血清（μL） 40
試劑一（μL） 320 280
試劑二（μL） 40 40
混勻，37℃，10min
試劑三（μL） 40 40
混勻，37℃，5min，對照管調零，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 562nm 處吸光值
A1，測完后立即加入試劑四
試劑四（μL） 60 60
混勻，37℃，5min，對照管調零，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 562nm 處吸光值
A2。ΔA=A2-A1。
血清總鐵結合力計算公式：
總鐵結合能力定義：37℃條件下，每升血清結合 Fe3+的 μmol 數(shù)。
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.5478x+0.0281，R
2
=0.9981
總鐵結合能力 TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.5478×V 反總÷V 樣= 20.99×（ΔA-0.0281）
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.2739x+0.0281，R
2
=0.9981
總鐵結合能力 TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.2739×V 反總÷V 樣= 41.98×（ΔA-0.0281）
V 反總：反應總體積，0.46mL；V 樣：反應中樣本體積，0.04mL
注意事項：
1. 吸光值大于 0.8，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2. 試劑二、試劑三有一定的毒性，操作時請做好防護措施。
3. 檢測限為 4.78μmol/L。