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ES細胞分化培養(yǎng)實驗
閱讀：557 發(fā)布時間：2020-9-9實驗材料未分化 ES 細胞
試劑、試劑盒PBS
儀器、耗材ES 分化培養(yǎng)基 移液器
實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：
未分化 ES 細胞
無 Ca2+ 和 Mg2+ PBS
ES 分化培養(yǎng)基
8 道微量移液器
無菌多道移液器容器
2. 收獲未分化 ES 細胞。
3. 在 100 mm 組織培養(yǎng)皿中加 10 ml PBS 備用。
4. 在一無菌容器內將 5X104 未分化 ES 細胞懸浮于 5 ml ES 分化培養(yǎng)基中。
5. 用多道移液器在 100 mm 組織培養(yǎng)皿蓋的內表面加 5 排 30 μl 液滴（每滴 300 個細胞）。
6. 拿起蓋，輕輕翻轉，蓋在內有 10 ml PBS 的培養(yǎng)皿上。
7. 小心將培養(yǎng)皿放于溫箱內，孵育 2 天。
實驗材料ES 細胞單一胚胎樣體
儀器、耗材細菌培養(yǎng)皿 ES 分化培養(yǎng)基
實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：
懸滴培養(yǎng)的 ES 細胞單一胚胎樣體
100 mm 細菌培養(yǎng)皿
ES 分化培養(yǎng)基
2. 在 100 mm 細菌培養(yǎng)皿中加 10 ml 預熱的分化培養(yǎng)基。
3. 從溫箱中取出培養(yǎng) 2 天的懸滴培養(yǎng)物。小心翻轉培養(yǎng)皿的蓋，用 10 ml 吸管收集內表面上的懸滴。
4. ES 細胞集落轉移到培養(yǎng)皿中。
5. 單一胚胎樣體孵育 3 天。
實驗材料單一胚胎樣體
儀器、耗材組織培養(yǎng)板 巴斯德吸管 玻璃蓋玻片 無菌鑷子 ES 分化培養(yǎng)基
實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：
培養(yǎng)懸液中的單一胚胎樣體
6 孔組織培養(yǎng)板
帶棉塞巴斯德吸管
明膠包被的玻璃蓋玻片
無菌鑷子
ES 分化培養(yǎng)基
2. 準備明膠包被的玻璃蓋玻片
3. 用無菌鑷子在 6 孔組織培養(yǎng)板的每孔中放一塊明膠包被的玻璃蓋玻片。
4. 在生物安全柜中取下培養(yǎng)板的蓋，紫外線下照射 3~5 分鐘，殺死可能污染的細菌。
5. 用帶棉塞巴斯德吸管把含有一個單一胚胎樣體的一小滴 ES 細胞懸液轉移到蓋玻片中心。
6. 孵育 4~5 小時，使單一胚胎樣體附著于明膠表面。保持培養(yǎng)物濕潤。
7. 吸附后，每孔中緩慢加入 2 ml 分化培養(yǎng)基（預熱至 37℃）。注意不要沖掉細胞。
8. 培養(yǎng)基變黃后換液，至少每周一次，加 2 ml 分化培養(yǎng)基。
9. 7 天內可觀察到心肌細胞的自動收縮。