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細(xì)胞膜流動(dòng)性測(cè)定實(shí)驗(yàn)
閱讀：1718 發(fā)布時(shí)間：2019-2-15膜結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)具有相對(duì)側(cè)向流動(dòng)性；細(xì)胞膜是由磷脂雙分子層和鑲嵌、貫穿在其中及吸附在其表面的蛋白質(zhì)組成的，磷脂雙分子層疏水的尾部在內(nèi)，親水頭部在外。
實(shí)驗(yàn)方法原理 常用于研究膜脂流動(dòng)性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH摻入到細(xì)胞膜脂烴鏈區(qū)后，介質(zhì)粘度增加，順反異構(gòu)受到抑制，成為能發(fā)光的全反構(gòu)型。
實(shí)驗(yàn)材料 腫瘤細(xì)胞
試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液DPH
儀器、耗材 熒光分光光度計(jì)離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞，以pH7.2，0.01 mol/l 磷酸鹽緩沖液洗滌兩次。
2. 取107個(gè)細(xì)胞，離心，加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。
3. 25℃振蕩溫育30 min，再以PBS洗滌1次。
4. 懸浮于4 ml PBS溶液中。
5. 測(cè)定儀器為熒光分光光度計(jì)，在激發(fā)波長(zhǎng)362 nm，發(fā)射波長(zhǎng)432 nm，狹縫10條件下測(cè)定熒光強(qiáng)度。
注意事項(xiàng)
由于DPH可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，后來又合成了其陽性離子衍生物1-（4-三苯基）-6-苯基-1,3,5-己三烯（TMDPH）。TMDPH不能透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，因此，理論上TMDPH標(biāo)記法較DPH標(biāo)記法更能準(zhǔn)確的反映膜脂流動(dòng)性。