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細胞生長曲線實驗
閱讀:581 發(fā)布時間:2019-1-14實驗方法原理
細胞生長曲線是測定細胞生長數(shù)的常用方法,是判定細胞活力的重要指標(biāo)。一般細胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁,隨后度過長短不同的潛伏期,即進入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準(zhǔn)確描述整個過程中細胞數(shù)目的動態(tài)變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指數(shù)生長期,呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數(shù)法進行。
實驗材料 細胞
試劑、試劑盒 D-Hanks液牛血清RPMI1640雙抗0.08%胰酶
儀器、耗材 凈化工作臺離心機恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱吸管培養(yǎng)瓶吸頭 槍頭24培養(yǎng)板膠塞微量加樣槍紅血球計數(shù)板
實驗步驟
1. 取生長狀態(tài)良好的細胞,采用一般傳代方法進行消化,制成細胞懸液。
2. 計數(shù),地將細胞分別接種于21~30個大小一致的培養(yǎng)瓶內(nèi)或培養(yǎng)孔(以24孔培養(yǎng)板為宜),每瓶或孔細胞總數(shù)要求一致,加入培養(yǎng)液的量也要一致。
3. 每天或每隔一天取出3瓶(孔)細胞進行計數(shù),計算均值。培養(yǎng)3~5 d 常要給未計數(shù)的細胞換液。
4. 以培養(yǎng)時間為橫軸,細胞數(shù)為縱軸(對數(shù)),描繪在半對數(shù)座標(biāo)紙上,連接成曲線后即成該細胞的生長曲線。
收起
注意事項
1. 細胞生長曲線雖然為常用,但有時其反映數(shù)值不夠,可有20~30%的誤差,需結(jié)合其它指標(biāo)進行分析。
2. 現(xiàn)在很多實驗室利用培養(yǎng)板采用MTT法進行生長曲線測定,較為簡便。
其他
1. 標(biāo)準(zhǔn)的細胞生長曲線近似“S”形,一般在傳代后天細胞數(shù)有所減少,再經(jīng)過幾天的潛伏適應(yīng)期,然后進入對數(shù)生長期,達到平臺期后生長穩(wěn)定,后到達衰老。
2. 在生長曲線上細胞數(shù)量增加1倍時間稱為細胞倍增時間,可以從曲線上換算出。