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線粒體電鏡照片觀察實(shí)驗(yàn)
閱讀：4997 發(fā)布時(shí)間：2018-12-18實(shí)驗(yàn)方法原理 線粒體同內(nèi)質(zhì)網(wǎng)一樣，除原核細(xì)胞和哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞外，其他所有細(xì)期線粒體(mitochodri)。一個(gè)細(xì)胞中線粒體的數(shù)目、形狀和大小常因細(xì)胞和生理狀況等不同而有較大的差別，如某種海藻中只有一個(gè)線粒體，玉米根品中有100~3000 個(gè)，而海膽卵母細(xì)胞中線粒體多達(dá)30 萬個(gè);在光學(xué)顯微鎮(zhèn)粒體呈線狀、顆粒狀、桿狀等，故稱線粒體; 大小一般直徑為0.5~1.Oom.0.2~ 2pm。電鏡下可見線粒體外包被雙層封閉的單位膜，內(nèi)含有主要由蛋白質(zhì)組成的質(zhì)(stroma,mati),內(nèi)、外膜并不相連，它們之間相間40~80A 。
實(shí)驗(yàn)材料 兔子
試劑、試劑盒 詹納斯綠B染液Ringer氏液
儀器、耗材 顯微鏡載玻片蓋玻片
實(shí)驗(yàn)步驟
一、線粒體的光鏡切片觀察
1. 用詹納斯綠B染色的兔肝細(xì)胞光鏡切片，肝細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。
二、線粒體的電鏡照片觀察
1. 不同細(xì)胞中線粒體的形態(tài)和數(shù)目不同。線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān)，線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。
2. 線粒體脊的數(shù)目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長(zhǎng)軸垂直排列，但也可見到與線粒體長(zhǎng)軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數(shù)量與細(xì)胞呼吸機(jī)能的強(qiáng)度有很大關(guān)系。
3. 這有三張線粒體超薄切片的電鏡照片：
（1）張是小鼠腎小管上皮細(xì)胞中線粒體的電鏡照片，可見線粒體呈橢圓形和桿狀，由雙層膜包圍，內(nèi)膜向內(nèi)突起成平板狀脊，脊與線粒體長(zhǎng)軸垂直排列，腎小管上皮細(xì)胞重吸收作用需要能量，線粒體數(shù)目多。
（2）第二張是恒河猴脊髓突觸內(nèi)線粒體?？梢娋€粒體體積小、數(shù)目多，脊與線粒體呈同心圓排列。
（3）第三張是小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體，線粒體的脊為分支的管，在照片上呈單層膜泡狀
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注意事項(xiàng)
在使用透視電子顯微鏡觀察生物樣品前樣品必須被預(yù)先處理。隨不同研究要求的需要科學(xué)家使用不同的處理方法。
固定：為了盡量保存樣本的原樣使用戊二醛來硬化樣本和使用鋨酸來染色脂肪。
冷固定：將樣本放在液態(tài)的乙烷中速凍，這樣水不會(huì)結(jié)晶，而形成非晶體的冰。這樣保存的樣品損壞比較小，但圖像的對(duì)比度非常低。
脫干：使用乙醇和丙酮來取代水。
墊入：樣本被墊入后可以分割。
分割：將樣本使用金剛石刃切成薄片。
染色：重的原子如鉛或鈾比輕的原子散射電子的能力高，因此可被用來提高對(duì)比度。
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其他
分辨能力是電子顯微鏡的重要指標(biāo)，電子顯微鏡的分辨能力以它所能分辨的相鄰兩點(diǎn)的小間距來表示，即稱為該儀器的高點(diǎn)分辨率：d=δ。顯然，分辨率越高，即d的數(shù)值（為長(zhǎng)度單位）愈小，則儀器所能分清被觀察物體的細(xì)節(jié)也就愈多愈豐富，也就是說這臺(tái)儀器的分辨能力或分辨本領(lǐng)越強(qiáng)。