谷氨酸脫氫酶（GLDH）是一種能夠催化谷氨酸和α-酮戊二酸相互轉(zhuǎn)化的酶。血液中GLDH水平升高表明肝臟受損，因此GLDH在肝病的診斷中發(fā)揮重要作用，尤其是與轉(zhuǎn)氨酶聯(lián)合使用時。表達微生物GLDH的轉(zhuǎn)基因植物在耐除草劑、耐干旱和抗病原體感染方面表現(xiàn)出更好的耐受性。BioAssay Systems的非放射性比色法GLDH檢測基于NADH偶聯(lián)的酶促反應(yīng)，將四氮唑鹽MTT還原為在565 nm處具有最大吸收峰的還原型MTT。565 nm處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品谷氨酸脫氫酶測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 快速靈敏。線性檢測范圍（20 uL樣本）：30分鐘反應(yīng)為0.4至80 U/L，120分鐘反應(yīng)的檢測下限為0.1 U/L。

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測量"型檢測?？稍诟咄亢Y選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個樣本。

應(yīng)用

用于測定生物樣本（如血漿、血清、尿液、組織和培養(yǎng)基）中的GLDH活性。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 檢測緩沖液：10 mL

- 二氫硫色素：120 uL

- NAD溶液：1 mL

- 校準液：1.5 mL

- MTT溶液：1.5 mL

- 底物：1.5 mL（1 M谷氨酸）

儲存條件

試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。有效期：收到后6個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時需遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟

本檢測基于動力學反應(yīng)。為確保孵育時間一致，加入工作試劑時需迅速，混合需短暫但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何所需溫度下進行（例如25°C或37°C）。

樣本準備

- 血清和血漿可直接檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將50 mg組織在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶酶收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當體積中勻漿或超聲處理細胞。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 所有樣本可在-20°C至-80°C下保存至少一個月。

試劑準備

將試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（例如25°C或37°C）。使用前短暫離心試管。工作試劑（WR）的配制：對于每次96孔檢測，將10 uL底物、14 uL MTT溶液、9 uL NAD溶液、1 uL二氫硫色素和50 uL檢測緩沖液混合?？瞻坠ぷ髟噭˙WR）的配制：對于每次96孔檢測，將14 uL MTT溶液、9 uL NAD溶液、1 uL二氫硫色素和60 uL檢測緩沖液混合（即不加底物）。建議現(xiàn)配現(xiàn)用工作試劑。

反應(yīng)準備

1. 將100 uL H?O（ODH?O）和100 uL校準液（ODCAL）溶液分別加入透明平底96孔板的孔中。

2. 將20 uL樣本分別加入兩個孔中。向一個樣本孔中加入80 uL WR，向另一個樣本孔中加入80 uL BWR。輕輕敲擊孔板以混合。

3. 在酶標儀上讀取565 nm處的吸光度（OD?），30分鐘后再次讀?。∣D??）。

所需材料（但未提供）

移液裝置及配件（如多通道移液器）、透明平底96孔板（如Corning Costar）、離心管和酶標儀。

文獻：

1. Chou, KH and WE Splittstoesser, WE (1972) Glutamate dehydrogenase from pumpkin cotyledons characterization and

isoenzymes. Plant Physiol. 49: 550-4.

2. Yamaya, T et. al. (1984). Characteristics of glutamate dehydrogenase in mitochondria prepared from corn shoots. Plant Physiol. 76: 1009-13.

3. Cho, SW et. al. (1995). Two soluble forms of glutamate dehydrogenase isoproteins from bovine brain. Eru. J. Biochem. 233:340-6.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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