嗜鉻粒蛋白A是一種49 kDa的酸性蛋白，由439個氨基酸組成，編碼于第14號染色體上。嗜鉻粒蛋白A在多種正常和腫瘤性內(nèi)分泌組織中被發(fā)現(xiàn)。研究表明，循環(huán)中嗜鉻粒蛋白A水平升高是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的標(biāo)志。

本ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）試劑盒用于定量檢測人EDTA血漿和血清樣本中的嗜鉻粒蛋白A（Chromogranin A）水平。僅供研究使用，不得用于診斷程序。

艾美捷人CgA ELISA試劑盒【#43-CGAHU-E01】檢測原理：

本ELISA試劑盒專為定量測量人EDTA血漿或血清樣本中的嗜鉻粒蛋白A而設(shè)計、開發(fā)和生產(chǎn)。檢測采用雙位點“夾心"技術(shù)，使用兩種選定的抗體，分別結(jié)合人嗜鉻粒蛋白A的不同表位。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本直接加入包被有多克隆嗜鉻粒蛋白A抗體的微孔板中。經(jīng)過第一次孵育后，微孔板壁上的抗體捕獲樣本中的人嗜鉻粒蛋白A，未結(jié)合的蛋白被洗去。然后向每個微孔中加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗人嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體，形成“單克隆抗體 - 人嗜鉻粒蛋白A - 多克隆抗體"的“夾心"復(fù)合物。未結(jié)合的單克隆抗體在隨后的洗滌步驟中被去除。為了檢測這一免疫復(fù)合物，微孔與底物溶液孵育一定時間，然后在分光光度微孔板讀數(shù)儀中測量。結(jié)合在微孔壁上的免疫復(fù)合物的酶活性與樣本中嗜鉻粒蛋白A的量成正比。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度與相應(yīng)人嗜鉻粒蛋白A濃度的關(guān)系，并使用四參數(shù)曲線擬合，生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。測試樣本中人嗜鉻粒蛋白A的濃度直接從該標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。

試劑：準(zhǔn)備與儲存

本試劑盒在收到后必須在2-8℃下儲存。試劑盒的有效期請參考試劑盒包裝上的標(biāo)簽。所有組分在有效期前均穩(wěn)定。

使用前請將所有試劑恢復(fù)至室溫。不同批次號的試劑盒組分不應(yīng)混合或互換使用。

抗CgA抗體包被微孔板

描述：包被有人嗜鉻粒蛋白A抗體的微孔板。

數(shù)量：1 x 96孔微孔板

儲存條件：2-8℃

CgA示蹤抗體

描述：在穩(wěn)定蛋白基質(zhì)中的辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗人嗜鉻粒蛋白A單克隆抗體。

數(shù)量：1 x 12 mL

儲存條件：2-8℃

CgA檢測緩沖液

描述：含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。

數(shù)量：1 x 30 mL

儲存條件：2-8℃

ELISA洗滌濃縮液

描述：含有非疊氮化物防腐劑的磷酸鹽緩沖液中的表面活性劑。

數(shù)量：1 x 30 mL

儲存條件：2-25℃

準(zhǔn)備方法：30倍濃縮液。使用前需與870 mL蒸餾水混合均勻。

ELISA HRP底物

描述：含有穩(wěn)定過氧化氫的四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。

數(shù)量：1 x 12 mL

儲存條件：2-8℃

ELISA終止液

描述：0.5 M硫酸。

數(shù)量：1 x 12 mL

儲存條件：2-25℃

嗜鉻粒蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品（1-6級）

描述：含有Proclin防腐劑的凍干牛血清白蛋白基質(zhì)中的人嗜鉻粒蛋白A。每瓶的具體濃度請參考標(biāo)簽。

數(shù)量：6 x 瓶

儲存條件：2-8℃（凍干），<-20℃（復(fù)溶）

注意事項：復(fù)溶后不超過3次凍融循環(huán)。

準(zhǔn)備方法：需用0.5 mL去離子水復(fù)溶，靜置10分鐘，然后通過倒置或輕柔渦旋混合微孔。確保所有固體W全溶解后使用。

嗜鉻粒蛋白A質(zhì)控品

描述：含有Proclin防腐劑的凍干牛血清白蛋白基質(zhì)中的人嗜鉻粒蛋白A。每瓶的具體濃度請參考標(biāo)簽。

數(shù)量：2 x 瓶

儲存條件：2-8℃（凍干），<-20℃（復(fù)溶）

注意事項：復(fù)溶后不超過3次凍融循環(huán)。

準(zhǔn)備方法：需用0.5 mL去離子水復(fù)溶，靜置10分鐘，然后通過倒置或輕柔渦旋混合微孔。確保所有固體W全溶解后使用。

安全注意事項：

本試劑僅供研究使用。

含牛血清白蛋白的試劑原料來源于美國本土48個州。僅從在獸醫(yī)監(jiān)督下飼養(yǎng)且未發(fā)現(xiàn)傳染性疾病的健康供體動物中獲取。

進行本檢測時請佩戴手套，并將這些試劑視為可能具有傳染性。

避免接觸含有過氧化氫或硫酸的試劑。

不要讓試劑進入眼睛、皮膚或衣物。

不要吞咽或吸入試劑的煙霧。

接觸后，用大量清水沖洗至少15分鐘。

使用良好的實驗室操作規(guī)范。

結(jié)果解讀：

質(zhì)控品和樣本的人嗜鉻粒蛋白A濃度直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，使用其各自的校正吸光度值。

對于高于最高檢測標(biāo)準(zhǔn)90%的樣本，強烈建議將樣本用檢測緩沖液稀釋1:100后重新檢測，以獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。例如，最高檢測標(biāo)準(zhǔn)約為2,500 ng/ml，任何顯示值大于2,250 ng/ml（2,500 ng/ml的90%）的樣本應(yīng)以1:100稀釋后重新檢測。如果1:100稀釋的樣本仍高于最高檢測標(biāo)準(zhǔn)，可以選擇將樣本值報告為高于最高檢測標(biāo)準(zhǔn)（例如>2,500 ng/ml），或者進一步測量1:10,000稀釋的樣本。建議獲得位于標(biāo)準(zhǔn)水平2至水平4之間的稀釋樣本值，將該測量值乘以稀釋因子以獲得報告值。

示例數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線：

展示了人嗜鉻粒蛋白A ELISA的典型吸光度數(shù)據(jù)和生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線。此曲線不應(yīng)替代每次檢測時運行的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

文獻參考：

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3. Hendy GN, Bevan S, Mattei MG, Mouland AJ. Chromogranin A. Clin Invest Med 1995;18:47-65.

4. Deftos LJ. Chromogranin A: its role in endocrine function and as an endocrine and

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5. Sobol RE, Memoli V, Deftos LJ. Hormone-negative, chromogranin A-positive endocrine tumors.

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