目前，在活細(xì)胞的DNA染色中，有兩組染料。組是Hoechst系列，它們具有細(xì)胞滲透性和熒光性（即低熒光直到結(jié)合靶DNA），但由于340-360nm范圍內(nèi)短紫外-藍(lán)色波長激發(fā)的要求，它們具有相當(dāng)?shù)?/span>毒性。

第二組活細(xì)胞染料由遠(yuǎn)紅外染料組成，如SiR-DNA™、Syto61™、Draq5™或Vybrant®Dyecycle™Ruby。這些染料克服了前一組光譜范圍的限制，允許使用波長約為650nm、發(fā)射波長約為700nm的低能激發(fā)光。這種光具有小的光毒性（SiR-Tubulin™和SiR-Actin™）并且細(xì)胞或組織樣品在該光譜范圍內(nèi)不吸收光也不自發(fā)熒光，這使得在厚樣本中有更深處成像成為可能。 

SiR-DNA™（SiR–Hoechst）是基于熒光團(tuán)硅羅丹明（SiR）和DNA小槽粘合劑雙苯甲酰亞胺（Hoechst）組合而成，它比遠(yuǎn)紅外染料組其他染料更具優(yōu)勢。

SiR–Hoechst（SiR-DNA™） 和其他遠(yuǎn)紅外DNA染料長時間活細(xì)胞成像對比圖，顯示SiR–Hoechst的低毒性及熒光穩(wěn)定性

市面上幾種常見DNA染料對比 

注：SiR-DNA™是Spirochrome SA公司的商標(biāo) (瑞士)

Vybrant® DyeCycle™ Ruby stain 和Syto61™是美國Thermo Fisher Scientific公司的商標(biāo)

DRAQ5™是Biostatus公司商標(biāo)

Hoechst™是美國Sanofi公司商標(biāo)

SiR-DNA™的主要發(fā)展方向是將熒光特性、高DNA特異性、低毒性與遠(yuǎn)紅外激發(fā)/發(fā)射范圍相結(jié)合。此外，由于其穩(wěn)定性和對遠(yuǎn)紅光的特性，探針在超分辨顯微鏡（STDE和SIM）中表現(xiàn)非常好。因此，SiR-DNA™是一種優(yōu)良的探針，其性能與SiR-tubulin和SiR-actin一樣。

在顯微鏡觀察和高通量篩選過程中，SiR-DNA™可以在不受紫外線刺激的情況下進(jìn)行簡單的核復(fù)染。在流式細(xì)胞術(shù)過程中，SiR-DNA™可以直接用于血液/BM的表型分析和細(xì)胞DNA含量分析，而無需紅細(xì)胞溶解或固定、滲透或RNase處理等步驟。 

說了這么多，您有沒有對SiR-DNA™活細(xì)胞染料很心動了？作為專業(yè)的生命科學(xué)解決方案供應(yīng)商，艾美捷科技為您推薦的活細(xì)胞DNA染色試劑盒： 

* 試劑盒均內(nèi)含Verapamil（維拉帕米，戊脈安），一種廣譜的外排泵抑制劑。

廠家質(zhì)檢：

常見問題整理：

是否兼容固定細(xì)胞？

SiR-DNA™可以與甲醇或PFA固定的細(xì)胞一起使用。然而，介質(zhì)對SiR-DNA™的亮度有很大的影響。當(dāng)混有PBS或Vectashield®的細(xì)胞產(chǎn)生很低的信號，混合有純甘油的細(xì)胞會染出非常明亮的細(xì)胞核。因此，我們建議在用SiR-DNA™染色固定細(xì)胞時使用純甘油作為介質(zhì)。

哪些物種的樣本和組織能被SiR探針染色？

下方僅引述已報告起作用的細(xì)胞系、組織或生物體。

智人：U2OS，成纖維細(xì)胞，HeLa，HUVEC, MCF-10A, HCT-116, A549,紅細(xì)胞

肌肉：C2C12，IA32，骨骼肌，原代心肌細(xì)胞，原代卵母細(xì)胞

褐家鼠：初級海馬神經(jīng)元、初級皮質(zhì)神經(jīng)元、NRK

風(fēng)信子：COS-7

金鯽：BHK

黑腹果蠅：Notum上皮，S2

迪德爾菲斯有袋動物：OK細(xì)胞

為什么SiR探針的背景比其他熒光團(tuán)低？

SiR探針使用的是近紅外/遠(yuǎn)紅外光譜范圍內(nèi)的激發(fā)光，從而避免較短波長的光產(chǎn)生自發(fā)熒光，從而避免產(chǎn)生較高的背景。SiR耦合探針具有兩種物理狀態(tài)：①非熒光，關(guān)閉狀態(tài)（spirolactone）和②高熒光，開啟狀態(tài)（zwitterion）。探針與其配體目標(biāo)的結(jié)合有利于高熒光的開放狀態(tài)，而未結(jié)合探針則存在于封閉、非熒光狀態(tài)（下圖）。從未結(jié)合態(tài)到結(jié)合態(tài)熒光放大率增加100倍。這就產(chǎn)生了一種高度敏感的生物傳感器，其中大部分熒光只發(fā)生在結(jié)合態(tài)。

SiR衍生物在熒光（開放）型（左結(jié)構(gòu)）和非熒光（封閉）型（右結(jié)構(gòu)）之間存在平衡

Nature Communication專屬產(chǎn)品文章精彩了解：

G. Lukinavicius et al.,SiR–Hoechst is a far-red DNA stain for live-cell nanoscopy, Nat. Commun. 6:8497 doi: 10.1038/ncomms9497 (2015).

不同類型細(xì)胞DNA成像圖，4μm SiR–Hoechst

SiR-Hoechst染色HeLa細(xì)胞的共聚焦（confocal）和電鏡（STED）對比

Cytoskeleton公司成立于1993年，專注于生物化學(xué)和細(xì)胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾（PTM）、細(xì)胞骨架研究相關(guān)的系列試劑盒和產(chǎn)品，尤其以細(xì)胞骨架相關(guān)研究見長，既能滿足于樣品較少的科學(xué)研究，也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。

目前主要的產(chǎn)品有340余種，其產(chǎn)品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達(dá)蛋白，小G蛋白，細(xì)胞外基質(zhì)，活細(xì)胞成像等相關(guān)領(lǐng)域，提供對應(yīng)的蛋白質(zhì)，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產(chǎn)品線還在不斷的擴(kuò)大中。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現(xiàn)有產(chǎn)品的藥物篩選服務(wù)。