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紫外分析儀的應(yīng)用原理
閱讀：773 發(fā)布時(shí)間：2020-4-13
紫外分析儀的應(yīng)用原理
紫外分析儀分為很多系列，有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列，不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長(zhǎng)引進(jìn)電泳分析、檢測(cè)，PCR產(chǎn)物檢測(cè)，DNA指紋圖譜分析，紙層分析或薄層分析等。
熒光技術(shù)在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中包括以下幾個(gè)方面：
1、物質(zhì)的定性：不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更高的選擇性。
2、定量測(cè)定：利用在較低濃度下熒光強(qiáng)度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測(cè)定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測(cè)定的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，例如維生素B2的測(cè)定*可達(dá)1毫微克/毫升，這一優(yōu)點(diǎn)使測(cè)定時(shí)所需要樣品量大大減少。 這種定量測(cè)定方法還可應(yīng)用于酶催化的反應(yīng)，只要反應(yīng)前后有熒光強(qiáng)度的變化，就可用來測(cè)定酶的含量及酶反應(yīng)的速率等。
1、物質(zhì)的定性：不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更高的選擇性。
2、定量測(cè)定：利用在較低濃度下熒光強(qiáng)度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測(cè)定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測(cè)定的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，例如維生素B2的測(cè)定*可達(dá)1毫微克/毫升，這一優(yōu)點(diǎn)使測(cè)定時(shí)所需要樣品量大大減少。 這種定量測(cè)定方法還可應(yīng)用于酶催化的反應(yīng)，只要反應(yīng)前后有熒光強(qiáng)度的變化，就可用來測(cè)定酶的含量及酶反應(yīng)的速率等。
3、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)可以研究生物大分子中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象：通過該現(xiàn)象的研究，可以獲得生物大分子內(nèi)部的許多信息。
4、研究生物大分子的物理化學(xué)特性及其分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象：熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團(tuán)的本身結(jié)構(gòu)有關(guān)，而且還強(qiáng)烈地依賴于發(fā)色團(tuán)周圍的環(huán)境，即對(duì)周圍環(huán)境十分敏感。利用此特點(diǎn)可通過測(cè)定上述有關(guān)熒光參數(shù)的變化來研究熒光發(fā)色團(tuán)所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(tuán)（如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內(nèi)源熒光）以外，可將一些特殊的熒光染料分子共價(jià)地結(jié)合或吸附在生物大分子的某一部位，通過測(cè)定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子，這種染料分子被稱為“熒光探針”，它們發(fā)出的熒光一般稱為外源熒光。熒光探針的應(yīng)用，大大地開拓了熒光技術(shù)在分子生物學(xué)中的應(yīng)用范圍。