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一、準備工作

1. 選擇合適的生物指示劑

• 根據(jù)滅菌物品的性質(zhì)和滅菌工藝要求，選擇含有合適微生物的生物指示劑。通常環(huán)氧乙烷滅菌生物指示劑含有枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC 9372）芽孢，這種芽孢對環(huán)氧乙烷的耐受性較強，能有效反映滅菌效果。

• 同時，要考慮生物指示劑的包裝形式，如自含式生物指示劑（內(nèi)部包含菌片、培養(yǎng)液和培養(yǎng)容器）和非自含式生物指示劑（菌片和培養(yǎng)液分開），根據(jù)實際使用場景和便捷性進行選擇。

2. 檢查生物指示劑完整性

• 仔細查看生物指示劑的包裝，確保包裝沒有破損、裂縫或其他損壞跡象。如果包裝損壞，可能會導致芽孢失活或者受到污染，從而影響監(jiān)測結(jié)果的準確性。

二、放置生物指示劑

1. 確定放置位置

• 對于滅菌物品，將生物指示劑放置在最難滅菌的部位。例如，在滅菌復雜的醫(yī)療器械套裝時，要將生物指示劑放置在器械的內(nèi)部通道、關節(jié)處或多層包裝的中心位置。如果是多孔物品，要確保生物指示劑位于物品的內(nèi)部孔隙中，以模擬環(huán)氧乙烷氣體最難穿透的情況。

• 對于大型滅菌設備，如環(huán)氧乙烷滅菌柜，若滅菌物品較多且分布在不同層次和位置，應在不同的位置放置生物指示劑，包括上層、中層、下層，以及靠近柜門和后壁等位置，以全面監(jiān)測滅菌效果。一般來說，每一個滅菌批次至少要放置一個生物指示劑。

三、進行滅菌操作

1. 按照正常滅菌程序操作

• 將放置好生物指示劑的滅菌物品放入滅菌設備，然后按照既定的環(huán)氧乙烷滅菌參數(shù)進行滅菌。這些參數(shù)通常包括環(huán)氧乙烷濃度（一般為 450 - 1200mg/L）、溫度（37 - 63℃）、相對濕度（40% - 80%）和時間（1 - 6 小時不等，具體取決于滅菌條件和物品性質(zhì)）。

四、培養(yǎng)生物指示劑

1. 滅菌后取出

• 滅菌過程結(jié)束后，等待滅菌設備內(nèi)的環(huán)氧乙烷氣體充分排出，壓力降至零，然后打開滅菌設備，小心取出生物指示劑。在取出過程中，要避免生物指示劑受到二次污染。

2. 進行培養(yǎng)

• 自含式生物指示劑：如果是自含式生物指示劑，按照產(chǎn)品說明書進行操作，通常是通過擠壓或折斷某個部位，使菌片與培養(yǎng)液接觸，然后將生物指示劑放入專用的培養(yǎng)設備中。培養(yǎng)溫度一般設定為 30 - 37℃，這是枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢能夠生長的適宜溫度。培養(yǎng)時間通常為 24 - 72 小時，具體時間根據(jù)生物指示劑的說明書確定。

• 非自含式生物指示劑：對于非自含式生物指示劑，將菌片放入合適的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液要含有芽孢生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，如碳源、氮源、無機鹽等，并且要具備指示芽孢是否生長的功能（如含有酸堿指示劑）。將裝有菌片和培養(yǎng)液的容器放入培養(yǎng)設備，培養(yǎng)條件同自含式生物指示劑。

五、結(jié)果判斷

1. 陽性結(jié)果判斷

• 如果在培養(yǎng)規(guī)定時間后，生物指示劑中的培養(yǎng)液顏色發(fā)生變化（如由紫色變?yōu)辄S色），并且有微生物生長的跡象（如培養(yǎng)液變渾濁），則判定為陽性結(jié)果。這表明滅菌不徹di，滅菌過程失敗。

2. 陰性結(jié)果判斷

• 如果培養(yǎng)后，生物指示劑中的培養(yǎng)液顏色保持不變（如仍為紫色），且沒有微生物生長的跡象（培養(yǎng)液清澈），則判定為陰性結(jié)果。這意味著滅菌有效，達到了預期的滅菌效果。

3. 記錄和報告結(jié)果

• 將生物指示劑的測試結(jié)果詳細記錄下來，包括滅菌批次、滅菌日期、培養(yǎng)日期、結(jié)果（陽性或陰性）等信息。如果出現(xiàn)陽性結(jié)果，需要及時報告相關部門，并對滅菌設備和滅菌過程進行檢查和重新評估，以確定滅菌失敗的原因并采取糾正措施。