商品介紹:
Pracinostat是一種有效的組蛋白去乙?;?HDAC)抑制劑,對HDACs的IC50值為40-140nM,可用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:929016-96-6 別名:SB939 純度:98.40% 分子量:358.48 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
白布勒酵母轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗原Anti-CHD4 Antibody人干擾調(diào)節(jié)因子(IRF)
多粘類芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子E2F-6抗原Anti-CHP2 Antibody人干擾調(diào)節(jié)因子(IRF)
新疆鹽地桿菌屬E2 tag多肽抗原Anti-CHPF Antibody人淋巴β(LTB)
葡萄球菌膠質(zhì)谷運載蛋白3抗原Anti-CHPF2 Antibody人淋巴β(LTB)
假單胞菌屬EB病編碼核蛋白-3Anti-CHPF2 Antibody人淋巴α(LTA)
弗雷克氏志賀氏菌內(nèi)皮轉(zhuǎn)化1抗原Anti-CHPF Antibody人淋巴α(LTA)
球毛殼內(nèi)皮轉(zhuǎn)化2抗原Anti-CHRD Antibody人CC趨化因子受體1(CCR1)
圍小叢殼菌嗜性粒陽離子蛋白抗原Anti-CHRNA10 Antibody人CC趨化因子受體1(CCR1)
蘇云金芽胞桿菌外胚層發(fā)育不良抗原Anti-CHRAC1 Antibody人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)
海洋交替赤桿菌類表皮生長因子域7抗原Anti-CHRNA9 Antibody人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)
假單胞菌早期反應基因-1/應急反應生長基因1抗原Anti-CHRM5 Antibody人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)
蘋果殼囊孢磷化eIF-4E(Ser209)抗原Anti-CHRNA3 Antibody人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)
枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原Anti-CHRNE Antibody人黏膜地址黏附分子(MAdCAM-1)
釀酒酵母彈性蛋白抗原Anti-CHST10 Antibody人黏膜地址黏附分子(MAdCAM-1)
薛瓦酵母ELAVL1/HuR多肽抗原Anti-CHST10 Antibody人β干擾(IFN-β/IFNB)
釀酒酵母表皮膜蛋白1抗原Anti-CHST13 Antibody人β干擾(IFN-β/IFNB)
妊娠相關(guān)血漿蛋白A2抗體產(chǎn)氣莢膜梭菌人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞
血漿谷羧肽抗體弗氏檸檬桿菌犬癌細胞
PAP-α/β/γ/多聚合α/β/γ抗體嗜熱脂肪芽孢桿菌人腦血管平滑肌細胞
纖溶相關(guān)蛋白B2抗體乙鈣不動桿菌人纖維肉瘤
組蛋白去乙?;?/span>(HDAC)抑制劑梨球腔 Boeravinone E
雜色曲霉 赤麻木脂
布魯氏 Bisandrographolide A
厚環(huán)乳牛肝 Bergenin pentaacetate
乳酸乳球乳亞種 Anisofolin A
枯草芽孢桿 苦杏堿 B
短桿狀馬賽 Alnusdiol
頭狀莖點霉 仙鶴草內(nèi)酯-6-O-葡萄糖甙
根瘤 腺華
少根根霉 9-Oxo-2,7-bisaboladien-15-oic ac
光滑假絲酵母 9-O-Feruloyl-5,5'-dimethoxylaric
枯草芽孢桿枯草亞種 7,4'-Di-O-methylapigenin 5-O-xyl
赭色擲孢酵母 6-O-trans-p-Coumaroylshanzhiside
金針菇 6-O-p-Methoxycinnamoylcatalpol
草菇 6-O-Benzoylphlorigidoside B